Opsomming: Mesenchimale stamselle is 'n subset van pluripotente stamselle wat uit die mesoderm geïsoleer kan word.Met hul selfreplikasie-vernuwing en multi-rigting differensiasie eienskappe, beskik hulle oor 'n hoë potensiaal vir verskeie terapieë in medisyne.Mesenchimale stamselle het 'n unieke immuunfenotipe en immuunreguleringsvermoë.Daarom word mesenchimale stamselle reeds wyd gebruik in stamseloorplantings, weefselingenieurswese en orgaanoorplanting.En Behalwe vir hierdie toepassings, word hulle as 'n ideale hulpmiddel in weefselingenieurswese as saaierselle in 'n reeks basiese en kliniese navorsingseksperimente gebruik.Tot dusver is daar nie 'n algemeen aanvaarde metode en standaard vir die gehaltebeheer van mesenchimale stamselle nie.Die Countstar Rigel kan die konsentrasie, lewensvatbaarheid en fenotipe eienskappe (en hul veranderinge) tydens die produksie en differensiasie van hierdie stamselle monitor.Die Countstar Rigel het ook die voordeel om addisionele morfologiese inligting te verkry, verskaf deur die permanente helderveld en fluoressensie-gebaseerde beeldopnames tydens die hele proses van selkwaliteitmonitering.Die Countstar Rigel bied 'n vinnige, gesofistikeerde en betroubare metode vir die gehaltebeheer van stamselle.
Materiale en metodes:
Adipose-afgeleide mesenchimale stamselle (AdMSCs) is geskenk deur professor Nianmin Qi, AO/PI-kleuringsoplossing (Shanghai RuiYu, CF002).Teenliggaampies: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC's is gekweek in 'n 37℃, 5% CO2-bevochtigde broeikas.Verteer met tripsien voor gebruik.
CD-merkerkleuringsprosedure is gevolg as die handleiding van teenliggaampies.
CD merker opsporing met Countstar Rigel:
1. 'n Seinkleurtoepassingsprosedure is geskep deur die PE-kanaal op PE-fluoressensie te stel.
2. 3 velde is uit elke kamer gevang.
3. Nadat beelding en aanvanklike analise voltooi is, is die drumpel (log hek) instelling vir positiewe en negatiewe transfeksie gestel deur FCS sagteware.
Gehaltebeheer van stamsel
Die volgende figuur (Figuur 1) toon die prosedure van stamselterapie .
Figuur 1: Die prosedure vir stamselterapie
Resultate:
Bepaling van die konsentrasie, lewensvatbaarheid, deursnee en samevoeging van AdMSC's.
Die lewensvatbaarheid van AdMSC's is bepaal deur AO/PI, 'n Dubbelkleur toedieningsprosedure is geskep deur Groen kanaal en Rooi kanaal te stel na beeld AO en PI fluoressensie, plus 'n helder veld.Voorbeeldbeelde is in Figuur 2 getoon.
Figuur 2. Beelde van voor vervoer en na vervoer van AdMSC's.A. Voor vervoer;'n verteenwoordigende beeld word gewys.B. Na vervoer;'n verteenwoordigende beeld word gewys.
Die lewensvatbaarheid van AdMSC's is drasties verander na vervoer in vergelyking met voor vervoer.Die lewensvatbaarheid voor vervoer was 92%, maar dit het na vervoer tot 71% verminder.Die resultaat is in Figuur 3 getoon.
Figuur 3. Die lewensvatbaarheidsresultate van AdMSC's (Voor vervoer en na vervoer)
Die deursnee en samevoeging is ook deur Countstar Rigel bepaal.Die deursnee van AdMSC's is drasties verander na vervoer in vergelyking met voor vervoer.Die deursnee voor vervoer was 19µm, maar dit het na vervoer toegeneem tot 21µm.Die samevoeging van voor vervoer was 20%, maar dit het na vervoer tot 25% toegeneem.Uit die beelde wat deur Countstar Rigel vasgelê is, is die fenotipe van AdMSC's drasties verander na vervoer.Die resultate is in Figuur 4 getoon.
Figuur 4: Die deursnee en samevoeging resultate.A: Die verteenwoordigende beelde van AdMSC's, die fenotipe van AdMSC's, is drasties verander na vervoer.B: Die samevoeging voor vervoer was 20%, maar dit het toegeneem tot 25% na vervoer.C: Die deursnee voor vervoer was 19µm, maar dit het na vervoer toegeneem tot 21µm.
Bepaal die immunofenotipe van AdMSC's deur Countstar Rigel
Die immunofenotipe van AdMSCs is bepaal deur Countstar Rigel, AdMSCs is onderskeidelik met verskillende teenliggaampies geïnkubeer (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).'n Seinkleurtoepassingsprosedure is geskep deur 'n Groen kanaal te stel om PE-fluoressensie te beeld, plus 'n helder veld.Helderveld prentjie verwysing segmentering is toegepas as 'n masker om die PE fluoressensie sein te monster.Die resultate van CD105 is getoon (Figuur 5).
Figuur 5: CD105-resultate van AdMSC's is deur Countstar Rigel bepaal.A: Kwantitatiewe ontleding van die positiewe persentasie van CD105 in verskillende monsters deur FCS express 5 plus sagteware.B: Beelde van hoë gehalte verskaf bykomende morfologiese inligting.C: Gevalideerde resultate deur duimnaels van elke enkele sel, die FCS-sagteware-instrumente het die selle in verskillende groepe verdeel volgens hul verskillende proteïenuitdrukking.
Ander teenliggaampies resultate is in Fig 6 getoon
Figuur 6: A: 'n Verteenwoordigende beeld van ASC's met tipiese spilvormige morfologie.Gevang deur OLYMPUS mikroskoop.Oorspronklike vergroting, (10x).B: Adipogeniese differensiasie van ASC's word bewys deur Ruthenium Red-kleuring wat areas van mineralisasie toon.Gevang deur OLYMPUS mikroskoop.Oorspronklike vergroting (10x).C: Countstar FL karakterisering van ASC's.
Opsomming:
Die Countstar FL kan die konsentrasie, lewensvatbaarheid en fenotipe eienskappe (en hul veranderinge) monitor tydens die produksie en differensiasie van hierdie stamselle.FCS express verskaf die funksie om elke seinsel te hersien, die data deur die beeld te bekragtig.Die gebruiker kan ook die selfvertroue hê om die volgende eksperimente uit te voer gebaseer op Countstar Rigel-resultate.Die Countstar Rigel bied 'n vinnige, gesofistikeerde en betroubare metode vir die gehaltebeheer van stamselle.
