Die ontleding van die leukosiete in volbloed is 'n roetine-toets in kliniese laboratorium of bloedbank.Die konsentrasie en lewensvatbaarheid van die leukosiete is die noodsaaklike indeks as kwaliteitsbeheer van bloedberging.Afgesien van leukosiete, bevat volbloed 'n groot aantal bloedplaatjies, rooibloedselle of sellulêre puin, wat dit onmoontlik maak om volbloed direk onder die mikroskoop of helderveldselteller te ontleed.Konvensionele metodes om witbloedselle te tel behels RBC-lise-proses, wat tydrowend is.
AOPI Dual-fluoresces telling is die toetstipe wat gebruik word vir die opsporing van selkonsentrasie en lewensvatbaarheid.Die oplossing is 'n kombinasie van akridien oranje (die groen-fluoresserende nukleïensuur vlek) en propidium jodied (die rooi-fluoresserende nukleïensuur vlek).Propidiumjodied (PI) is 'n membraanuitsluitingskleurstof wat slegs selle met gekompromitteerde membrane binnedring, terwyl akridienoranje in staat is om alle selle in 'n populasie binne te dring.Wanneer beide kleurstowwe in die kern teenwoordig is, veroorsaak propidiumjodied 'n vermindering in akridien oranje fluoressensie deur fluoressensie resonansie energie-oordrag (FRET).As gevolg hiervan, vlek kernselle met ongeskonde membrane fluoresserend groen en word as lewendig getel, terwyl kernselle met gekompromitteerde membrane slegs fluoresserend rooi kleur en as dood getel word wanneer die Countstar® Rigel-stelsel gebruik word.
Countstar Rigel is 'n ideale oplossing vir baie komplekse selpopulasie-karakteriseringstoetse, wat dit moontlik maak om witbloedselle in volbloed vinnig te ontleed.
Eksperimentele prosedure:
1.Neem 20 µl bloedmonster en verdun die monster in 180 µl PBS.
2. Voeg 12µl AO/PI-oplossing by 12µl monster, liggies gemeng met pipet;
3. Trek 20µl mengsel in kamerskyfie;
4. Laat die selle vir ongeveer 1 minuut in die kamer sit;
5.Insekteer die skyfie in Countstar FL-instrument;
6.Kies die "AO/PI-lewensvatbaarheid"-toets, en voer dan monster-ID vir hierdie monster in.
7.Kies Verdunningsverhouding, Seltipe, klik 'Run' om die toets te begin.
Let op: AO en PI is 'n potensiële karsinogeen.Dit word aanbeveel dat die operateur persoonlike beskermende toerusting (PPE) dra om direkte kontak met die vel en oë te vermy.
Resultaat:
1. Bright Field Beeld van volbloed
In die helderveldbeeld van die volbloed is WBC's nie tussen die rooibloedselle sigbaar nie.(Figuur 1)
Figuur 1 Helderveldbeeld van volbloed.
2. Fluoresensie Beeld van volbloed
Die AO- en PI-kleurstof is albei vlekke DNA in die selkern van selle.Daarom kan bloedplaatjies, rooibloedselle of sellulêre puin nie leukosietkonsentrasie en lewensvatbaarheidsresultaat beïnvloed nie.Lewende leukosiete (Groen) en dooie leukosiete (Rooi) word maklik in die fluoressensiebeelde gevisualiseer.(Figuur 2)
Figuur 2 Fluoresensie Beelde van volbloed.(A).Beeld van AO Channel;(B) Beeld van PI-kanaal;(C) Voeg beelde van AO en PI Channel saam.
3. Konsentrasie en lewensvatbaarheid van leukosiete
Die Countstar FL-sagteware tel outomaties selle van drie kamerafdelings en bereken die gemiddelde waarde van totale WBC-seltelling (1202), konsentrasie (1,83 x 106 selle/ml) en % lewensvatbaarheid (82,04%).Die volbloedbeelde en data kan maklik as PDF, Beeld of Excel uitgevoer word vir bykomende ontleding of data-argivering.
Figuur 3 Skermskoot van Countstar Rigel sagteware
