የ Countstar ስርዓት የምስል ሳይቶሜትር እና የሕዋስ ቆጣሪን ወደ አንድ የቤንች-ላይ መሣሪያ ያጣምራል።ይህ በመተግበሪያ የሚመራ፣ የታመቀ እና አውቶሜትድ የሴል ኢሜጂንግ ሲስተም የሕዋስ ቆጠራን፣ አዋጭነት (AO/PI፣ trypan blue)፣ አፖፕቶሲስ (Annexin V-FITC/PI)፣ ሕዋስን ጨምሮ ለካንሰር ሴል ምርምር ሁሉን-በአንድ መፍትሄ ይሰጣል። ዑደት (PI) እና የጂኤፍፒ/አርኤፍፒ ሽግግር።
ረቂቅ
ካንሰር በአለም አቀፍ ደረጃ ለሞት ከሚዳርጉ ምክንያቶች አንዱ ሲሆን አዳዲስ የካንሰር ህክምና ዘዴዎችን ማዘጋጀት ትልቅ ጠቀሜታ አለው.የካንሰር ሴል የካንሰር መሰረታዊ የምርምር ነገር ነው, የተለያዩ መረጃዎችን ከካንሰር ሕዋስ መገምገም ያስፈልጋል.ይህ የምርምር ቦታ ፈጣን፣ አስተማማኝ፣ ቀላል እና ዝርዝር የሕዋስ ትንተና ያስፈልገዋል።የ Countstar ስርዓት ለካንሰር ሕዋስ ትንተና ቀላል የመፍትሄ መድረክ ያቀርባል.
የካንሰር ሕዋስ አፖፕቶሲስን በ Countstar Rigel አጥኑ
የአፖፕቶሲስ ምርመራዎች የሕዋስ ባህሎችን ጤና ከመገምገም ጀምሮ የአንድ ፓነል ውህዶችን መርዛማነት ለመገምገም ለተለያዩ ዓላማዎች በመደበኛነት በብዙ ላቦራቶሪዎች ውስጥ ያገለግላሉ።
አፖፕቶሲስ ምርመራ የሕዋስ አፖፕቶሲስን መቶኛ በአንክሲን V-FITC/PI ማቅለሚያ ዘዴ ለመወሰን የሚያገለግል ዓይነት ነው።አኔክሲን ቪ ከ phosphatidylserine (PS) ጋር ከጥንት አፖፕቶሲስ ሴል ወይም ኒክሮሲስ ሴል ጋር ይያያዛል።ፒአይ ወደ ኔክሮቲክ/በጣም ዘግይቶ-ደረጃ አፖፖቲክ ሴሎች ብቻ ይገባል::(ምስል 1)
መ፡ ቀደምት አፖፕቶሲስ አኔክሲን ቪ (+)፣ PI (-)
ለ፡ ዘግይቶ አፖፕቶሲስ አኔክሲን ቪ (+)፣ PI (+)
ምስል1፡ በAnnexin V FITC እና PI የታከሙ የ293 ህዋሶች የ Countstar Rigel ስዕሎች (5 x ማጉላት) ዝርዝሮች
የካንሰር ሕዋስ የሕዋስ ዑደት ትንተና
የሕዋስ ዑደት ወይም የሴል-ዲቪዥን ዑደት በሴል ውስጥ የሚከሰቱ ተከታታይ ክስተቶች ወደ ዲ ኤን ኤ (ዲ ኤን ኤ መባዛት) ሁለት ሴት ሴሎችን ለማምረት የሚያመሩ ተከታታይ ክስተቶች ናቸው.ኒውክሊየስ ባላቸው ሴሎች ውስጥ፣ እንደ eukaryotes፣ የሕዋስ ዑደቱም በሦስት ወቅቶች ይከፈላል፡ ኢንተርፋዝ፣ ሚቶቲክ (ኤም) ደረጃ እና ሳይቶኪኔሲስ።ፕሮፒዲየም አዮዳይድ (PI) የሕዋስ ዑደትን ለመለካት በተደጋጋሚ የሚያገለግል የኑክሌር ቀለም ነው።ቀለም ወደ ሕያው ሴሎች ውስጥ መግባት ስለማይችል ሴሎቹ ከመበከላቸው በፊት በኤታኖል ተስተካክለዋል.ከዚያ በኋላ ሁሉም ሴሎች ተበክለዋል.ለመከፋፈል የሚዘጋጁ ሴሎች እየጨመረ የሚሄደው የዲ ኤን ኤ መጠን ይይዛሉ እና በተመጣጣኝ የጨመረው ፍሎረሰንት ያሳያሉ።በእያንዳንዱ የሴል ዑደት ውስጥ ያሉትን የሴሎች መቶኛ ለመወሰን የፍሎረሰንት ጥንካሬ ልዩነቶች ጥቅም ላይ ይውላሉ.Countstar ምስሉን መቅዳት ይችላል እና ውጤቶቹ በFCS ኤክስፕረስ ሶፍትዌር ውስጥ ይታያሉ።(ምስል 2)
ምስል 2፡ MCF-7 (A) እና 293T (B) በሴል ዑደት ማወቂያ ኪት ከ PI ጋር ተበክለዋል፣ ውጤቶቹ በ Countstar Rigel ተወስነዋል እና በFCS ኤክስፕረስ ተንትነዋል።
በህዋሱ ውስጥ የመኖር አቅም እና የጂኤፍፒ ሽግግር ውሳኔ
በባዮፕሮሰሲው ወቅት ጂኤፍፒ ብዙውን ጊዜ እንደ አመላካች ከዳግም ፕሮቲን ጋር ለመዋሃድ ይጠቅማል።የጂኤፍፒ ፍሎረሰንት ዒላማውን የፕሮቲን አገላለጽ ሊያንጸባርቅ እንደሚችል ይወስኑ።Countstar Rigel የጂኤፍፒ ሽግግርን እንዲሁም አዋጭነትን ለመፈተሽ ፈጣን እና ቀላል ዳሰሳ ያቀርባል።ሴሎች የሞቱትን ሴሎች ብዛት እና አጠቃላይ የሕዋስ ብዛትን ለመወሰን በፕሮፒዲየም አዮዳይድ (PI) እና Hoechst 33342 ተበክለዋል።Countstar Rigel የጂኤፍፒ አገላለጽ ቅልጥፍናን እና አዋጭነትን በተመሳሳይ ጊዜ ለመገምገም ፈጣን፣ መጠናዊ ዘዴን ያቀርባል።(ምስል 4)
ምስል 4፡ ህዋሶች Hoechst 33342 (ሰማያዊ) በመጠቀም ይገኛሉ እና የጂኤፍፒ ህዋሶችን መግለጽ (አረንጓዴ) መቶኛ በቀላሉ ሊታወቅ ይችላል።ሕያው ያልሆኑ ሕዋሳት በፕሮፒዲየም አዮዳይድ (PI; ቀይ) ተበክለዋል.
አዋጭነት እና የሕዋስ ብዛት
AO/PI Dual-fluoresces ቆጠራ የሕዋስ ትኩረትን፣ አዋጭነትን ለመለየት የሚያገለግል የምርመራ ዓይነት ነው።በተለያዩ የሕዋስ ዓይነቶች መሠረት የሕዋስ መስመር ቆጠራ እና ዋና የሕዋስ ቆጠራ ተከፍሏል።መፍትሄው አረንጓዴ-ፍሎረሰንት ኑክሊክ አሲድ ነጠብጣብ, አሲሪዲን ብርቱካንማ እና ቀይ ፍሎረሰንት ኑክሊክ አሲድ ነጠብጣብ, ፕሮፒዲየም አዮዳይድ ጥምረት ይዟል.ፕሮፒዲየም አዮዳይድ የሜምብ ማግለል ቀለም ሲሆን ይህም የተበላሹ ሽፋን ያላቸው ሴሎች ውስጥ ሲገባ አcridine ብርቱካናማ በአንድ ህዝብ ውስጥ ያሉትን ሁሉንም ሴሎች ውስጥ ዘልቆ ይገባል።ሁለቱም ማቅለሚያዎች በኒውክሊየስ ውስጥ በሚገኙበት ጊዜ, ፕሮፒዲየም አዮዳይድ የ acridine ብርቱካናማ ፍሎረሰንት በፍሎረሰንት ሬዞናንስ ኢነርጂ ማስተላለፊያ (FRET) እንዲቀንስ ያደርጋል.በውጤቱም፣ ያልተነካ ሽፋን ያላቸው ኒውክሌድ ሴሎች ፍሎረሰንት አረንጓዴ ለብሰው እንደ ህያው ሆነው ይቆጠራሉ፣ ነገር ግን ኑክሌር የተበላሹ ህዋሶች የፍሎረሰንት ቀይ ቀለምን ብቻ ያበላሻሉ እና የ Countstar Rigel ስርዓትን ሲጠቀሙ እንደ ሙት ይቆጠራሉ።እንደ ቀይ የደም ሴሎች፣ ፕሌትሌቶች እና ፍርስራሾች ያሉ ኒውክሌድ ያልሆኑ ነገሮች ፍሎረሴስ አይሆኑም እና በCountstar Rigel ሶፍትዌር ችላ ይባላሉ።(ምስል 5)
ምስል 5፡ Countstar ለቀላል፣ ትክክለኛ የPBMC ትኩረት እና አዋጭነት ለመወሰን ባለሁለት-ፍሎረሰንት ቀለም ዘዴን አመቻችቷል።በAO/PI የተበከሉ ናሙናዎች በCountstar Rigel ሊተነተኑ ይችላሉ።
