በሙሉ ደም ውስጥ ያለ የሉኪዮተስ ቀጥተኛ ትንተና

በሙሉ ደም ውስጥ ያሉ ሉኪዮተስቶችን መተንተን በክሊኒካዊ ላብራቶሪ ወይም በደም ባንክ ውስጥ መደበኛ ምርመራ ነው።የሉኪዮትስ ትኩረት እና አዋጭነት የደም ማከማቻ ጥራት ቁጥጥር ወሳኝ መረጃ ጠቋሚ ነው።ከሉኪዮትስ በተጨማሪ ሙሉ ደም ብዙ ቁጥር ያላቸው ፕሌትሌቶች፣ ቀይ የደም ሴሎች ወይም ሴሉላር ፍርስራሾችን ይዟል፣ ይህም ሙሉ ደም በአጉሊ መነጽር ወይም በብሩህ የመስክ ሴል ቆጣሪ ስር በቀጥታ ለመተንተን የማይቻል ያደርገዋል።ነጭ የደም ሴሎችን ለመቁጠር የተለመዱ ዘዴዎች RBC lysis ሂደትን ያካትታል, ይህም ጊዜ የሚወስድ ነው.

AOPI Dual-fluoresces ቆጠራ የሕዋስ ትኩረትን እና አዋጭነትን ለመለየት የሚያገለግል የምርመራ ዓይነት ነው።መፍትሄው የአክሪዲን ብርቱካን (አረንጓዴ-ፍሎረሰንት ኑክሊክ አሲድ ነጠብጣብ) እና ፕሮፒዲየም አዮዳይድ (ቀይ-ፍሎረሰንት ኑክሊክ አሲድ ነጠብጣብ) ጥምረት ነው.ፕሮፒዲየም አዮዳይድ (PI) የሜምብ ማግለል ቀለም ሲሆን ወደ ሴሎች የሚገቡት የተበላሹ ሽፋኖች ብቻ ሲሆኑ አcridine ብርቱካን ግን በሕዝብ ውስጥ ያሉትን ሁሉንም ሴሎች ውስጥ ዘልቆ መግባት ይችላል.ሁለቱም ማቅለሚያዎች በኒውክሊየስ ውስጥ በሚገኙበት ጊዜ, ፕሮፒዲየም አዮዳይድ የ acridine ብርቱካናማ ፍሎረሰንት በፍሎረሰንት ሬዞናንስ ኢነርጂ ማስተላለፊያ (FRET) እንዲቀንስ ያደርጋል.በውጤቱም፣ ያልተነካ ሽፋን ያላቸው ኑክሌር ህዋሶች ፍሎረሰንት አረንጓዴ ለብሰዋል እና እንደ ህይወት ይቆጠራሉ፣ ነገር ግን ኑክሌር የተበላሹ ህዋሶች የፍሎረሰንት ቀይ ቀለምን ብቻ የሚያበላሹ እና የ Countstar® Rigel ስርዓትን ሲጠቀሙ እንደ ሙት ይቆጠራሉ።

Countstar Rigel በጠቅላላው ደም ውስጥ ያሉ ነጭ የደም-ሕዋሳትን በፍጥነት ለመተንተን ለብዙ ውስብስብ የሕዋስ ህዝብ ባህሪያት ጥሩ መፍትሄ ነው።

የሙከራ ሂደት፡-

1.20µl የደም ናሙና ይውሰዱ እና ናሙናውን በ180 µl PBS ውስጥ ይቅቡት።
2.12µl AO/PI መፍትሄ ወደ 12µl ናሙና አክል፣ በቀስታ ከ pipette ጋር ተቀላቅሏል።
3.20µl ቅልቅል ወደ ክፍል ስላይድ ይሳሉ;
4.ሴሎች በክፍሉ ውስጥ ለ 1 ደቂቃ ያህል እንዲቀመጡ ይፍቀዱ;
ወደ Countstar FL መሣሪያ 5.Insect ስላይድ;
6. "AO/PI Viability" የሚለውን ምረጥ፣ ከዚያ ለዚህ ናሙና የናሙና መታወቂያ አስገባ።
7.Select Dilution ratio, Cell Type, ፈተናውን ለመጀመር 'Run' የሚለውን ጠቅ ያድርጉ.

ጥንቃቄ፡ AO እና PI እምቅ ካርሲኖጅንን ናቸው።ከቆዳ እና ከዓይኖች ጋር በቀጥታ እንዳይገናኙ ኦፕሬተሩ የግል መከላከያ መሳሪያዎችን (PPE) እንዲለብስ ይመከራል.

ውጤት፡

1. የሙሉ ደም ብሩህ የመስክ ምስል

በደማቅ የሜዳ ምስል ውስጥ በቀይ የደም ሴሎች መካከል WBC አይታዩም.(ምስል 1)

ምስል 1 የሙሉ ደም ብሩህ መስክ ምስል.

2. የፍሎረሰንት ምስል ሙሉ ደም

የ AO እና PI ቀለም ሁለቱም በሴሎች ሴል ኒውክሊየስ ውስጥ ዲ ኤን ኤ ያበላሻሉ.ስለዚህ, ፕሌትሌትስ, ቀይ የደም ሴሎች ወይም ሴሉላር ፍርስራሾች የሉኪዮትስ ትኩረትን እና የአዋጭነት ውጤትን ሊነኩ አይችሉም.የቀጥታ ሉኪዮትስ (አረንጓዴ) እና የሞቱ ሉኪዮተስ (ቀይ) በፍሎረሰንት ምስሎች ውስጥ በቀላሉ ይታያሉ።(ምስል 2)

ምስል 2 የፍሎረሰንት ምስሎች ሙሉ ደም.(ሀ)የ AO ቻናል ምስል;(ለ) የ PI Channel ምስል;(ሐ) የAO እና PI Channel ምስሎችን አዋህድ።

3. የሉኪዮትስ ትኩረት እና አዋጭነት

የ Countstar FL ሶፍትዌር የሶስት ክፍል ክፍሎችን በራስ ሰር ይቆጥራል እና የጠቅላላ WBC ሕዋስ ብዛት (1202)፣ የትኩረት (1.83 x 106 ሴሎች/ml) እና % አዋጭነት (82.04%) አማካይ ዋጋ ያሰላል።አጠቃላይ የደም ምስሎች እና ውሂቦች ለተጨማሪ ትንተና ወይም መረጃን ለማስቀመጥ እንደ ፒዲኤፍ፣ ምስል ወይም ኤክሴል በቀላሉ ወደ ውጭ መላክ ይችላሉ።

ምስል 3 የ Countstar Rigel ሶፍትዌር ቅጽበታዊ ገጽ እይታ