يجمع نظام بين مقياس خلوي الصورة وعداد الخلية في أداة واحدة على المنضدة.يوفر نظام التصوير الخلوي المدعوم بالتطبيق والمضغوط والآلي حلاً شاملاً لأبحاث الخلايا السرطانية ، بما في ذلك عد الخلايا ، والجدوى (AO / PI ، تريبان الأزرق) ، موت الخلايا المبرمج (Annexin V-FITC / PI) ، الخلية دورة (PI) ، وتعداء GFP / RFP.
الملخص
يعد السرطان أحد الأسباب الرئيسية للوفاة في جميع أنحاء العالم ، كما أن تطوير طرق جديدة لعلاج السرطان له أهمية كبيرة.الخلية السرطانية هي موضوع البحث الأساسي للسرطان ، يجب تقييم المعلومات المختلفة من الخلية السرطانية.يحتاج مجال البحث هذا إلى تحليل خلوي سريع وموثوق وبسيط ومفصل.يوفر نظام منصة حل بسيطة لتحليل الخلايا السرطانية.
دراسة موت الخلايا المبرمج السرطاني بواسطة Countstar Rigel
تُستخدم فحوصات موت الخلايا المبرمج بشكل روتيني في العديد من المختبرات لأغراض متنوعة من تقييم صحة مزارع الخلايا إلى تقييم سمية مجموعة من المركبات.
مقايسة موت الخلايا المبرمج هو نوع يستخدم لتحديد نسبة موت الخلايا المبرمج للخلايا بواسطة طريقة تلطيخ Annexin V-FITC / PI.يرتبط أنكسين الخامس بالفوسفاتيديل سيرين (PS) بخلايا موت الخلايا المبرمج المبكرة أو خلية نخر.لا يدخل PI إلا في الخلايا الميتة النخرية / في مرحلة متأخرة جدًا من الخلايا المبرمج.(شكل 1)
أ ، موت الخلايا المبرمج المبكر Annexin V (+) ، PI (-)
ب ، موت الخلايا المبرمج المتأخر Annexin V (+) ، PI (+)
الشكل 1: تفاصيل Countstar Rigel (تكبير 5 ×) لـ 293 خلية ، تمت معالجتها باستخدام Annexin V FITC و PI
تحليل دورة الخلية للخلية السرطانية
دورة الخلية أو دورة الانقسام الخلوي هي سلسلة الأحداث التي تحدث في الخلية مما يؤدي إلى انقسامها وتضاعف حمضها النووي (تكرار الحمض النووي) لإنتاج خليتين ابنتيتين.في الخلايا ذات النواة ، كما هو الحال في حقيقيات النوى ، تنقسم دورة الخلية أيضًا إلى ثلاث فترات: الطور البيني ، والمرحلة الانقسامية (M) ، والحركة الخلوية.يوديد البروبيديوم (PI) هو صبغة تلطيخ نووي تستخدم بشكل متكرر لقياس دورة الخلية.نظرًا لأن الصبغة لا يمكن أن تدخل الخلايا الحية ، يتم إصلاح الخلايا بالإيثانول قبل التلوين.ثم يتم صبغ جميع الخلايا.ستحتوي الخلايا التي تستعد للانقسام على كميات متزايدة من الحمض النووي وتعرض زيادة الفلورة بشكل متناسب.تستخدم الاختلافات في شدة التألق لتحديد النسبة المئوية للخلايا في كل مرحلة من مراحل دورة الخلية.يمكن التقاط الصورة وسيتم عرض النتائج في برنامج FCS express.(الشكل 2)
الشكل 2: تم تلوين MCF-7 (A) و 293 T (B) باستخدام مجموعة أدوات الكشف عن دورة الخلية مع PI ، وتم تحديد النتائج بواسطة Countstar Rigel ، وتم تحليلها بواسطة FCS express.
الجدوى وتحديد GFP تعداء في الخلية
أثناء المعالجة الحيوية ، غالبًا ما يستخدم GFP للاندماج مع البروتين المؤتلف كمؤشر.تحديد الفلورسنت GFP يمكن أن يعكس التعبير البروتين الهدف.يقدم سريعًا وبسيطًا لاختبار تعداء GFP بالإضافة إلى الجدوى.تم تلوين الخلايا باستخدام Propidium iodide (PI) و Hoechst 33342 لتحديد عدد الخلايا الميتة ومجموع عدد الخلايا.يقدم طريقة كمية سريعة لتقييم كفاءة تعبير GFP وجدواه في نفس الوقت.(الشكل 4)
الشكل 4: توجد الخلايا باستخدام Hoechst 33342 (أزرق) ويمكن بسهولة تحديد النسبة المئوية للخلايا التي تعبر عن GFP (باللون الأخضر).تلطخ الخلية غير القابلة للنمو باستخدام يوديد البروبيديوم (PI ؛ أحمر).
الجدوى وعدد الخلايا
عد AO / PI ثنائي الفلورة هو نوع الفحص المستخدم للكشف عن تركيز الخلية ، والجدوى.وهي مقسمة إلى عد خط الخلية وعد الخلايا الأولية وفقًا لنوع الخلية المختلفة.يحتوي المحلول على مزيج من صبغة الحمض النووي الفلورية الخضراء ، والبرتقال أكريدين ، وصبغة الحمض النووي الأحمر الفلوري ، يوديد البروبيديوم.يوديد البروبيديوم هو صبغة استبعاد غشاء لا تدخل إلا إلى الخلايا ذات الأغشية المعرضة للخطر بينما يخترق أكريدين البرتقالي جميع الخلايا في مجموعة سكانية.عند وجود كلتا الأصباغ في النواة ، يتسبب يوديد البروبيديوم في انخفاض التألق البرتقالي أكريدين عن طريق نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET).نتيجة لذلك ، تلطخ الخلايا المنواة ذات الأغشية السليمة باللون الأخضر الفلوري وتُحسب على أنها حية ، في حين أن الخلايا ذات النواة ذات الأغشية المخترقة تلطخ اللون الأحمر الفلوري فقط ويتم حسابها على أنها ميتة عند استخدام نظام .المواد غير المنواة مثل خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية والحطام لا تتألق ويتم تجاهلها بواسطة برنامج .(الشكل 5)
الشكل 5: قام بتحسين طريقة تلطيخ الأسفار المزدوج لتحديد بسيط ودقيق لتركيز PBMC وجدواه.يمكن تحليل العينات الملطخة بـ AO / PI باستخدام Counstar Rigel
