يتم خلط عينة تحتوي على خلايا في التعليق مع صبغة Trypan الزرقاء ، ثم يتم سحبها في شريحة Chamber التي تم تحليلها بواسطة Automated Cell Counter.استنادًا إلى مبدأ عد الخلايا الزرقاء التريبان الكلاسيكي ، تدمج أدوات تقنية التصوير البصري المتقدمة ، وتقنية التعرف على الصور الذكية وخوارزميات البرامج القوية ليس فقط لتوفير تركيز الخلية وقابليتها للحياة ، ولكن أيضًا لتوفير معلومات عن تركيز الخلية ، والقدرة على البقاء ، ومعدل التجميع ، الاستدارة ، وتوزيع القطر بجولة واحدة فقط.
تحليل الخلية المجمعة
الشكل 3 الشكل 3 عد الخلايا المجمعة.
ألف صورة لعينة الخلية ؛
صورة لعينة خلية مع علامة تعريف بواسطة برنامج .(الدائرة الخضراء: الخلية الحية ، الدائرة الصفراء: الخلية الميتة ، الدائرة الحمراء: الخلية المجمعة).
C. الرسم البياني المجمع
تكون بعض الخلايا الأولية أو خلايا الثقافة الفرعية عرضة للتجمع عند حالة الثقافة السيئة أو الهضم المفرط ، مما يتسبب في صعوبة كبيرة في عد الخلايا.من خلال وظيفة معايرة التجميع ، يمكن تحقيق حساب تحفيزي للتجمعات لضمان عد الخلايا بدقة والحصول على معدل التجميع والرسم البياني للتجميع ، مما يوفر أساسًا للمُجربين للحكم على حالة الخلايا.
مراقبة نمو الخلايا
الشكل 4 الشكل 4 منحنى نمو الخلية.
منحنى نمو الخلية هو طريقة شائعة لقياس النمو المطلق لعدد الخلايا ، وهو مؤشر مهم لتحديد تركيز الخلية وأحد المعلمات الأساسية لثقافة الخصائص البيولوجية الأساسية للخلايا.من أجل وصف التغيير الديناميكي في عدد الخلايا بدقة خلال العملية بأكملها ، يمكن تقسيم منحنى النمو النموذجي إلى 4 أجزاء: فترة الحضانة مع النمو البطيء ؛مرحلة النمو الأسي مع الانحدار الكبير ومرحلة الهضبة وفترة الانحدار.يمكن الحصول على منحنى نمو الخلية عن طريق رسم عدد الخلايا الحية (10'000 / مل) مقابل زمن الثقافة (ساعة أو د).
قياس تركيز الخلايا واستمراريتها
تم التقاط صور الشكل 1 بواسطة Countstar BioTech حيث تم تلوين خلايا (Vero و 3T3 و 549 و B16 و CHO و Hela و SF9 و MDCK) في التعليق بواسطة Trypan Blue على التوالي.
ينطبق Countstar على الخلايا التي يتراوح قطرها بين 5-180um ، مثل خلية الثدييات ، وخلية الحشرات ، وبعض العوالق.
قياس حجم الخلية
الشكل 2 الشكل 2. قياس حجم الخلية من خلايا CHO قبل وبعد تعداء البلازميد.
ألف صور لتعليق خلايا CHO ملطخة باللون الأزرق التربان قبل وبعد تعداء البلازميد.
مقارنة الرسم البياني لحجم خلية CHO قبل وبعد تعداء البلازميد.
يعد تغيير حجم الخلية ميزة أساسية ويتم قياسه بشكل شائع في أبحاث الخلايا.عادةً ما يتم قياسه في هذه التجارب: تعداء الخلايا واختبار الأدوية ومقايسات تنشيط الخلية.يوفر بيانات مورفولوجيا إحصائية ، مثل أحجام الخلايا ، في غضون 20 ثانية.
يمكن أن يعطي عداد الخلايا الآلي Countstar البيانات المورفولوجية للخلايا ، بما في ذلك الرسوم البيانية للدائرية والقطر.
