الملخص: الخلايا الجذعية الوسيطة هي مجموعة فرعية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يمكن عزلها من الأديم المتوسط.من خلال تجديدها ذاتي التكرار وخصائص التمايز متعددة الاتجاهات ، فإنها تمتلك إمكانات عالية للعلاجات المختلفة في الطب.الخلايا الجذعية الوسيطة لها نمط ظاهري مناعي فريد وقدرة على تنظيم المناعة.لذلك ، تُستخدم الخلايا الجذعية اللحمية على نطاق واسع بالفعل في عمليات زرع الخلايا الجذعية وهندسة الأنسجة وزرع الأعضاء.وإلى جانب هذه التطبيقات ، يتم استخدامها كأداة مثالية في هندسة الأنسجة كخلايا بذر في سلسلة من التجارب البحثية الأساسية والسريرية.حتى الآن ، لا توجد طريقة ومعيار مقبولان على نطاق واسع لمراقبة جودة الخلايا الجذعية الوسيطة.يمكن مراقبة خصائص التركيز والحيوية والنمط الظاهري (وتغيراتها) أثناء إنتاج هذه الخلايا الجذعية وتمايزها. أيضًا بميزة في الحصول على معلومات مورفولوجية إضافية ، يتم توفيرها من خلال تسجيلات الصور المستندة إلى المجال الساطع والتألق الدائم أثناء العملية الكاملة لمراقبة جودة الخلية.يقدم طريقة سريعة ومتطورة وموثوقة لمراقبة جودة الخلايا الجذعية.
المواد والأساليب:
تم منح الخلايا الجذعية المشتقة من اللحمة الدهنية (AdMSCs) من قبل الأستاذ Nianmin Qi ، محلول تلطيخ AO / PI (Shanghai RuiYu ، CF002).الجسم المضاد: CD29 ، CD34 ، CD45 ، CD56 ، CD73 ، CD105 ، HLADR (شركة BD).
تمت زراعة AdMSCs في حاضنة مرطبة 37 ℃ ، 5٪ CO2.هضم مع التربسين قبل الاستخدام.
تم اتباع إجراء تلطيخ علامة القرص المضغوط كدليل للأجسام المضادة.
الكشف عن علامة القرص المضغوط باستخدام Countstar Rigel :
1. تم إنشاء إجراء تطبيق إشارة اللون عن طريق تعيين قناة PE على صورة مضان PE.
2. تم التقاط 3 حقول من كل غرفة.
3. بعد اكتمال التصوير والتحليل الأولي ، تم تعيين إعداد العتبة (بوابة السجل) للترنسفكأيشن الإيجابية والسلبية بواسطة برنامج FCS.
مراقبة جودة الخلايا الجذعية
يوضح الشكل التالي (الشكل 1) إجراء العلاج بالخلايا الجذعية .
الشكل 1: إجراء العلاج بالخلايا الجذعية
نتائج:
تحديد تركيز وصلاحية وقطر وتجميع AdMSCs.
تم تحديد صلاحية AdMSCs بواسطة AO / PI ، وتم إنشاء إجراء تطبيق ثنائي اللون عن طريق تعيين قناة خضراء وقناة حمراء على صورة مضان AO و PI ، بالإضافة إلى حقل مشرق.تم عرض الصور النموذجية في الشكل 2.
الشكل 2. صور قبل النقل وبعد النقل من AdMSCs.أ. قبل النقل ؛يتم عرض صورة تمثيلية.ب. بعد النقل.يتم عرض صورة تمثيلية.
تم تغيير جدوى AdMSCs بشكل كبير بعد النقل بالمقارنة مع ما قبل النقل.كانت الصلاحية قبل النقل 92٪ ، لكنها تقلصت إلى 71٪ بعد النقل.تم عرض النتيجة في الشكل 3.
الشكل 3. نتائج جدوى AdMSCs (قبل النقل وبعد النقل)
تم تحديد القطر والتجميع أيضًا بواسطة .تم تغيير قطر AdMSCs بشكل كبير بعد النقل بالمقارنة مع ما قبل النقل.كان القطر قبل النقل 19 ميكرومتر ، لكنه زاد إلى 21 ميكرومتر بعد النقل.كان تراكم ما قبل النقل 20٪ ، لكنه زاد إلى 25٪ بعد النقل.من الصور التي تم التقاطها بواسطة ، تم تغيير النمط الظاهري لـ AdMSCs بشكل كبير بعد النقل.تم عرض النتائج في الشكل 4.
الشكل 4: نتائج القطر والتجميع.ج: الصور التمثيلية لـ AdMSCs ، تم تغيير النمط الظاهري لـ AdMSCs بشكل كبير بعد النقل.ب: كان التجميع قبل النقل 20٪ لكنه زاد إلى 25٪ بعد النقل.ج: كان القطر قبل النقل 19 ميكرومتر لكنه زاد إلى 21 ميكرومتر بعد النقل.
تحديد النمط المناعي من AdMSCs بواسطة Countstar Rigel
تم تحديد النمط المناعي لـ AdMSCs بواسطة ، تم تحضين AdMSCs بأجسام مضادة مختلفة على التوالي (CD29 ، CD34 ، CD45 ، CD56 ، CD73 ، CD105 ، HLA-DR).تم إنشاء إجراء تطبيق إشارة اللون عن طريق تعيين قناة خضراء على صورة مضان PE ، بالإضافة إلى حقل مشرق.تم تطبيق تجزئة مرجع الصورة الميدانية الساطعة كقناع لأخذ عينات من إشارة التألق PE.تم عرض نتائج CD105 (الشكل 5).
الشكل 5: تم تحديد نتائج CD105 من AdMSCs بواسطة .ج: التحليل الكمي للنسبة المئوية الإيجابية لـ CD105 في عينات مختلفة بواسطة برنامج FCS express 5 plus.ب: توفر الصور عالية الجودة معلومات مورفولوجية إضافية.ج: النتائج التي تم التحقق منها بواسطة الصور المصغرة لكل خلية مفردة ، قسمت أدوات برنامج FCS الخلايا إلى مجموعات مختلفة وفقًا لتعبير البروتين المتغير.
تم عرض نتائج الأجسام المضادة الأخرى في الشكل 6
الشكل 6: أ: صورة تمثيلية لمخازن الخدمة مع مورفولوجيا نموذجية على شكل مغزل.تم التقاطها بواسطة مجهر OLYMPUS.التكبير الأصلي (10x).ب: يتضح التمايز الشحمي لـ ASCs من خلال تلطيخ الروثينيوم الأحمر الذي يُظهر مناطق التمعدن.تم التقاطها بواسطة مجهر OLYMPUS.التكبير الأصلي (10x).C: FL لـ ASCs.
ملخص:
يمكن لـ Countstar FL مراقبة خصائص التركيز والجدوى والنمط الظاهري (وتغيراتها) أثناء إنتاج هذه الخلايا الجذعية وتمايزها.يوفر FCS express الوظيفة لمراجعة كل خلية إشارة ، والتحقق من صحة البيانات من خلال الصورة.يمكن للمستخدم أيضًا أن يكون لديه الثقة لإجراء التجارب التالية بناءً على نتائج .يقدم طريقة سريعة ومتطورة وموثوقة لمراقبة جودة الخلايا الجذعية.
