Countstar sistemi görüntü sitometrini və hüceyrə sayğacını tək dəzgah üstü alətdə birləşdirir.Bu tətbiqə əsaslanan, yığcam və avtomatlaşdırılmış hüceyrə görüntüləmə sistemi xərçəng hüceyrələrinin tədqiqi üçün hüceyrə sayımı, canlılıq (AO/PI, tripan mavi), apoptoz (Annexin V-FITC/PI), hüceyrə daxil olmaqla, hamısı bir yerdə həll edir. dövrü (PI) və GFP/RFP transfeksiyası.
mücərrəd
Xərçəng bütün dünyada ölümün əsas səbəblərindən biridir və xərçəngin yeni müalicə üsullarının inkişafı böyük əhəmiyyət kəsb edir.Xərçəng hüceyrəsi xərçəngin əsas tədqiqat obyektidir, xərçəng hüceyrəsindən müxtəlif məlumatların qiymətləndirilməsi lazımdır.Bu tədqiqat sahəsinin sürətli, etibarlı, sadə və ətraflı hüceyrə analizinə ehtiyacı var.Countstar sistemi xərçəng hüceyrələrinin analizi üçün sadə həll platforması təqdim edir.
Countstar Rigel tərəfindən Xərçəng Hüceyrəsinin Apoptozunu öyrənin
Apoptoz analizləri bir çox laboratoriyalarda hüceyrə mədəniyyətlərinin sağlamlığının qiymətləndirilməsindən tutmuş birləşmələr panelinin toksikliyinin qiymətləndirilməsinə qədər müxtəlif məqsədlər üçün istifadə olunur.
Apoptoz analizi, Annexin V-FITC/PI boyanma üsulu ilə hüceyrələrin apoptoz faizini təyin etmək üçün istifadə edilən bir növdür.Annexin V erkən apoptoz hüceyrəsi və ya nekroz hüceyrəsi ilə fosfatidilserinə (PS) bağlanır.PI yalnız nekrotik/çox gec mərhələdə apoptotik hüceyrələrə daxil olur.(Şəkil 1)
A: Erkən apoptoz Annexin V (+), PI (-)
B: Gec apoptoz Əlavə V (+), PI (+)
Şəkil 1: Annexin V FITC və PI ilə işlənmiş 293 hüceyrədən ibarət Countstar Rigel şəkillərinin böyüdülmüş detalları (5 dəfə böyüdülmə)
Xərçəng Hüceyrəsinin Hüceyrə Dövrünün Təhlili
Hüceyrə dövrü və ya hüceyrə bölünməsi dövrü hüceyrədə baş verən və iki qız hüceyrəsi meydana gətirmək üçün DNT-nin (DNT replikasiyası) bölünməsinə və təkrarlanmasına səbəb olan hadisələr silsiləsi.Nüvəli hüceyrələrdə, eukariotlarda olduğu kimi, hüceyrə dövrü də üç dövrə bölünür: interfaza, mitotik (M) faza və sitokinez.Propidium iyodid (PI) hüceyrə dövranını ölçmək üçün tez-tez istifadə olunan nüvə rəngləmə boyasıdır.Boya canlı hüceyrələrə daxil ola bilmədiyi üçün hüceyrələr boyanmadan əvvəl etanol ilə bərkidilir.Sonra bütün hüceyrələr boyanır.Bölünməyə hazırlaşan hüceyrələr artan miqdarda DNT ehtiva edəcək və proporsional olaraq artan flüoresans göstərəcək.Hüceyrə dövrünün hər bir mərhələsində hüceyrələrin faizini müəyyən etmək üçün flüoresan intensivliyindəki fərqlərdən istifadə edilir.Countstar şəkli çəkə bilər və nəticələr FCS ekspres proqramında göstəriləcək.(Şəkil 2)
Şəkil 2: MCF-7 (A) və 293T (B) PI ilə hüceyrə dövrü Detection Kit ilə boyandı, nəticələr Countstar Rigel tərəfindən təyin edildi və FCS express tərəfindən təhlil edildi.
Hüceyrədə Canlılıq və GFP Transfeksiyasının Müəyyən edilməsi
Bioproses zamanı GFP tez-tez göstərici kimi rekombinant zülal ilə birləşmək üçün istifadə olunur.GFP floresan hədəf protein ifadə əks etdirə bilər müəyyən.Countstar Rigel GFP transfeksiyasını, eləcə də canlılığı sınamaq üçün sürətli və sadə analiz təklif edir.Ölü hüceyrə populyasiyasını və ümumi hüceyrə populyasiyasını müəyyən etmək üçün hüceyrələr Propidium iyodid (PI) və Hoechst 33342 ilə boyandı.Countstar Rigel eyni zamanda GFP ifadə effektivliyini və canlılığını qiymətləndirmək üçün sürətli, kəmiyyət metodu təklif edir.(Şəkil 4)
Şəkil 4: Hüceyrələr Hoechst 33342 (mavi) istifadə edərək yerləşdirilir və GFP ifadə edən hüceyrələrin faizi (yaşıl) asanlıqla müəyyən edilə bilər.Yaşamayan hüceyrələr propidium yodid (PI; qırmızı) ilə boyanır.
Canlılıq və Hüceyrə Sayısı
AO/PI Dual-fluoresces hesablanması hüceyrə konsentrasiyasını, canlılığını aşkar etmək üçün istifadə edilən analiz növüdür.Fərqli hüceyrə növünə görə hüceyrə xəttinin sayılmasına və ilkin hüceyrə sayılmasına bölünür.Məhlul yaşıl-flüoresan nuklein turşusu ləkəsi, akridin narıncı və qırmızı flüoresan nuklein turşusu ləkəsi, propidium yodidin birləşməsini ehtiva edir.Propidium yodid, yalnız membranları zədələnmiş hüceyrələrə daxil olan, akridin narıncı isə populyasiyanın bütün hüceyrələrinə nüfuz edən bir membran xaric boyasıdır.Hər iki boya nüvədə olduqda, propidium yodid flüoresan rezonans enerjisinin ötürülməsi (FRET) ilə akridin narıncı flüoresansında azalmaya səbəb olur.Nəticədə, membranları zədələnmiş nüvəli hüceyrələr flüoresan yaşıl rəngə boyanır və canlı sayılır, halbuki zədələnmiş membranları olan nüvəli hüceyrələr yalnız flüoresan qırmızı rəngə boyanır və Countstar Rigel sistemindən istifadə edərkən ölü sayılırlar.Qırmızı qan hüceyrələri, trombositlər və zibil kimi nüvəsiz material floresan etmir və Countstar Rigel proqramı tərəfindən nəzərə alınmır.(Şəkil 5)
Şəkil 5: Countstar PBMC konsentrasiyasının və canlılığının sadə, dəqiq müəyyən edilməsi üçün ikili flüoresan boyama üsulunu optimallaşdırmışdır.AO/PI ilə boyanmış nümunələr Counstar Rigel ilə təhlil edilə bilər
