Süspansiyonda hüceyrələri olan nümunə Tripan mavi boyası ilə qarışdırılır, sonra Countstar Avtomatlaşdırılmış Hüceyrə Sayğacı tərəfindən təhlil edilən Countstar Kamera Slaydına çəkilir.Klassik tripan mavi hüceyrə sayma prinsipinə əsaslanaraq, Countstar-ın alətləri qabaqcıl optik görüntüləmə texnologiyasını, ağıllı təsviri tanıma texnologiyasını və güclü proqram alqoritmlərini birləşdirir, təkcə hüceyrə konsentrasiyası və canlılığını təmin etmir, həm də hüceyrə konsentrasiyası, canlılıq, birləşmə dərəcəsi, yuvarlaqlıq haqqında məlumat verir. , və yalnız bir qaçış ilə diametr paylanması.
Birləşdirilmiş Hüceyrə Analizi
Şəkil 3 Birləşdirilmiş hüceyrələrin hesablanması.
A. Hüceyrə nümunəsinin şəkli;
B. Countstar BioTech proqramı tərəfindən identifikasiya nişanı olan Hüceyrə Nümunəsinin şəkli.(Yaşıl Dairə: Canlı hüceyrə, Sarı Dairə: Ölü hüceyrə, Qırmızı Dairə: Birləşdirilmiş Hüceyrə).
C. Birləşdirilmiş Histoqram
Bəzi ilkin hüceyrələr və ya subkultura hüceyrələri zəif mədəniyyət vəziyyətində və ya həddindən artıq həzm zamanı yığılmağa meyllidirlər, beləliklə hüceyrələrin sayılmasında böyük çətinlik yaradırlar.Aqreqasiya Kalibrləmə Funksiyası ilə Countstar hüceyrələrin dəqiq hesablanmasını təmin etmək və yığılma dərəcəsini və aqreqasiya histoqramını əldə etmək üçün aqreqasiyaların stimullaşdırıcı hesablamasını həyata keçirə bilər, beləliklə, eksperimentatorların hüceyrələrin vəziyyətini mühakimə etmək üçün əsas yaradır.
Hüceyrə artımının monitorinqi
Şəkil 4 Hüceyrə böyüməsi əyrisi.
Hüceyrə böyümə əyrisi hüceyrə sayının mütləq artımını ölçmək üçün ümumi bir üsul, hüceyrə konsentrasiyasını təyin etmək üçün vacib bir göstərici və hüceyrələrin əsas bioloji xüsusiyyətlərinin mədəniyyətinin əsas parametrlərindən biridir.Bütün proses boyu hüceyrələrin sayının dinamik dəyişməsini dəqiq təsvir etmək üçün tipik böyümə əyrisini 4 hissəyə bölmək olar: yavaş böyümə ilə inkubasiya dövrü;böyük yamac, plato fazası və eniş dövrü ilə eksponensial artım mərhələsi.Hüceyrə böyümə əyrisi canlı hüceyrələrin sayını (10'000/mL) kultura vaxtı (saat və ya d) ilə müqayisə etməklə əldə edilə bilər.
Hüceyrə konsentrasiyasının və canlılığının ölçülməsi
Şəkil 1 Şəkillər Countstar BioTech tərəfindən çəkilib, asqıdakı hüceyrələr (Vero, 3T3, 549, B16, CHO, Hela, SF9 və MDCK) müvafiq olaraq Trypan Blue ilə boyanıb.
Countstar, məməli hüceyrəsi, həşərat hüceyrəsi və bəzi planktonlar kimi diametri 5-180 um arasında olan hüceyrələrə tətbiq olunur.
Hüceyrə Ölçüsü Ölçüsü
Şəkil 2 Plazmid transfeksiyasından əvvəl və sonra CHO hüceyrələrinin hüceyrə ölçüsünün ölçülməsi.
A. Plazmid transfeksiyasından əvvəl və sonra tripan mavisi ilə boyanmış CHO hüceyrələrinin suspenziyasının şəkilləri.
B. Plazmid transfeksiyasından əvvəl və sonra CHO hüceyrə ölçüsü histoqramının müqayisəsi.
Hüceyrə ölçüsünün dəyişməsi əsas xüsusiyyətdir və adətən hüceyrə tədqiqatında ölçülür.Normalda bu təcrübələrdə ölçüləcək: hüceyrə transfeksiyası, dərman testi və hüceyrə aktivləşdirmə analizləri.Countstar 20-ci illər ərzində hüceyrələrin ölçüləri kimi statistik morfologiya məlumatları təqdim edir.
Countstar avtomatlaşdırılmış hüceyrə sayğacı dairəvilik və diametr histoqramları daxil olmaqla hüceyrələrin morfoloji məlumatlarını verə bilər.
