Tam qanda leykositlərin təhlili klinik laboratoriyada və ya qan bankında adi bir analizdir.Leykositlərin konsentrasiyası və canlılığı qan anbarının keyfiyyətinə nəzarət kimi mühüm göstəricidir.Leykositlərdən başqa, tam qanda çoxlu sayda trombositlər, qırmızı qan hüceyrələri və ya hüceyrə zibilləri var ki, bu da tam qanı birbaşa mikroskop və ya parlaq sahə hüceyrə sayğacı altında təhlil etməyi qeyri-mümkün edir.Ağ qan hüceyrələrini saymaq üçün ənənəvi üsullar çox vaxt aparan RBC lizisi prosesini əhatə edir.
AOPI Dual-fluoresces hesablanması hüceyrə konsentrasiyasını və canlılığını aşkar etmək üçün istifadə edilən analiz növüdür.Həll akridin narıncı (yaşıl-flüoresan nuklein turşusu ləkəsi) və propidium yodidin (qırmızı-flüoresan nuklein turşusu ləkəsi) birləşməsidir.Propidium iyodid (PI) yalnız membranları zədələnmiş hüceyrələrə daxil olan bir membran xaric edən boyadır, akridin narıncı isə populyasiyanın bütün hüceyrələrinə nüfuz edə bilir.Hər iki boya nüvədə olduqda, propidium yodid flüoresan rezonans enerjisinin ötürülməsi (FRET) ilə akridin narıncı flüoresansında azalmaya səbəb olur.Nəticədə, membranları zədələnmiş nüvəli hüceyrələr floresan yaşıl rəngə boyanır və canlı sayılır, halbuki zədələnmiş membranları olan nüvəli hüceyrələr yalnız flüoresan qırmızı rəngə boyanır və Countstar® Rigel sistemindən istifadə edərkən ölü sayılırlar.
Countstar Rigel, tam qanda ağ qan hüceyrələrini sürətlə təhlil etməyə imkan verən bir çox kompleks hüceyrə populyasiyasının xarakteristikası analizləri üçün ideal həlldir.
Eksperimental prosedur:
1. 20 µl qan nümunəsi götürün və nümunəni 180 µl PBS-də seyreltin.
2. 12µl AO/PI məhlulunu 12µl nümunəyə əlavə edin, pipetlə yumşaq qarışdırın;
3. 20µl qarışığı kamera slaydına çəkin;
4.Hüceyrələrin təxminən 1 dəqiqə kamerada yerləşməsinə icazə verin;
5.Slaydı Countstar FL alətinə daxil edin;
6. “AO/PI Viability” analizini seçin, sonra bu nümunə üçün Nümunə ID-sini daxil edin.
7. Qatlaşdırma nisbətini, Hüceyrə Növünü seçin, testi başlamaq üçün "Çalışdır" düyməsini basın.
Diqqət: AO və PI potensial kanserogendir.Dəri və gözlərlə birbaşa təmasdan qaçmaq üçün operatora fərdi qoruyucu vasitələr (PPE) taxması tövsiyə olunur.
Nəticə:
1. Tam qanın parlaq sahə şəkli
Tam qanın parlaq sahə görüntüsündə WBC qırmızı qan hüceyrəsi arasında görünmür.(Şəkil 1)
Şəkil 1 Tam qanın parlaq sahə şəkli.
2. Tam qanın floresan şəkli
AO və PI boyası hər ikisi hüceyrələrin hüceyrə nüvəsində DNT-ni ləkələyir.Buna görə də, trombositlər, qırmızı qan hüceyrələri və ya hüceyrə zibilləri leykositlərin konsentrasiyasına və canlılığına təsir göstərə bilməz.Canlı leykositlər (Yaşıl) və ölü leykositlər (Qırmızı) flüoresan görüntülərdə asanlıqla görünür.(Şəkil 2)
Şəkil 2 Tam qanın floresan şəkilləri.(A).AO Kanalının Şəkili;(B) PI kanalının təsviri;(C) AO və PI Kanalının şəkillərini birləşdirin.
3. Leykositlərin konsentrasiyası və canlılığı
Countstar FL proqramı avtomatik olaraq üç kameralı bölmənin hüceyrələrini hesablayır və ümumi WBC hüceyrələrinin sayının (1202), konsentrasiyanın (1,83 x 106 hüceyrə/ml) və % canlılığın (82,04%) orta dəyərini hesablayır.Bütün qan şəkilləri və məlumatları əlavə təhlil və ya məlumatların arxivləşdirilməsi üçün asanlıqla PDF, Şəkil və ya Excel kimi ixrac edilə bilər.
Şəkil 3 Countstar Rigel Proqram təminatının ekran görüntüsü
