Резюме: Мезенхимните стволови клетки са подгрупа от плурипотентни стволови клетки, които могат да бъдат изолирани от мезодермата.Със своето саморепликационно обновяване и характеристики на многопосочна диференциация, те притежават висок потенциал за различни терапии в медицината.Мезенхимните стволови клетки имат уникален имунен фенотип и способност за имунна регулация.Следователно мезенхимните стволови клетки вече се използват широко в трансплантациите на стволови клетки, тъканното инженерство и трансплантацията на органи.И освен тези приложения, те се използват като идеален инструмент в тъканното инженерство като сеячни клетки в серия от основни и клинични изследователски експерименти.Досега няма широко приет метод и стандарт за контрол на качеството на мезенхимните стволови клетки.Countstar Rigel може да наблюдава концентрацията, жизнеспособността и характеристиките на фенотипа (и техните промени) по време на производството и диференциацията на тези стволови клетки.Countstar Rigel също има предимството при получаването на допълнителна морфологична информация, осигурена от постоянно светло поле и базирани на флуоресценция записи на изображения по време на целия процес на наблюдение на качеството на клетките.Countstar Rigel предлага бърз, усъвършенстван и надежден метод за контрол на качеството на стволовите клетки.
Материали и методи:
Мезенхимни стволови клетки, получени от адипоза (AdMSCs), бяха подарени от професор Nianmin Qi, разтвор за оцветяване с AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Антитяло: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs се култивират в 37 ℃, 5% CO2 овлажнен инкубатор.Смилайте с трипсин преди употреба.
Процедурата за оцветяване на CD маркер се следва като ръководство за антитяло.
Откриване на CD маркер с Countstar Rigel:
1. Създадена е процедура за прилагане на цвят на сигнала чрез настройване на PE канала да изобразява PE флуоресценция.
2. От всяка камера бяха заловени 3 полета.
3. След завършване на изображенията и първоначалния анализ, настройката на прага (log gate) за положителна и отрицателна трансфекция беше зададена от FCS софтуер.
Контрол на качеството на стволовите клетки
Следващата фигура (Фигура 1) показва процедурата на терапия със стволови клетки .
Фигура 1: Процедурата за терапия със стволови клетки
Резултати:
Определяне на концентрацията, жизнеспособността, диаметъра и агрегирането на AdMSCs.
Жизнеспособността на AdMSCs се определя от AO/PI. Създадена е процедура за двуцветно приложение чрез настройване на зеления канал и червения канал на изображение на AO и PI флуоресценция, плюс ярко поле.Примерни изображения са показани на фигура 2.
Фигура 2. Изображения на AdMSC преди транспортиране и след транспортиране.А. Преди транспортиране;се показва представително изображение.Б. След транспортиране;се показва представително изображение.
Жизнеспособността на AdMSC се промени драстично след транспортирането в сравнение с преди транспортирането.Жизнеспособността преди транспортиране е 92%, но намалява до 71% след транспортиране.Резултатът е показан на фигура 3.
Фигура 3. Резултати за жизнеспособност на AdMSCs (преди транспортиране и след транспортиране)
Диаметърът и агрегирането също бяха определени от Countstar Rigel.Диаметърът на AdMSC е променен драстично след транспортиране в сравнение с преди транспортирането.Диаметърът преди транспортирането е 19 µm, но се увеличава до 21 µm след транспортирането.Агрегацията на преди транспортирането беше 20%, но се увеличи до 25% след транспортирането.От изображенията, заснети от Countstar Rigel, фенотипът на AdMSCs е променен драстично след транспортиране.Резултатите са показани на фигура 4.
Фигура 4: Диаметърът и резултатите от агрегирането.О: Представителните изображения на AdMSCs, фенотипът на AdMSCs бяха променени драстично след транспортиране.B: Агрегацията преди транспортирането беше 20%, но се увеличи до 25% след транспортирането.C: Диаметърът преди транспортирането е 19 µm, но се увеличава до 21 µm след транспортирането.
Определете имунофенотипа на AdMSCs от Countstar Rigel
Имунофенотипът на AdMSCs се определя от Countstar Rigel, AdMSCs се инкубират съответно с различни антитела (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Създадена е процедура за прилагане на цвят на сигнала чрез задаване на зелен канал за изобразяване на PE флуоресценция, плюс ярко поле.Сегментацията на референтната картина на светло поле беше приложена като маска за вземане на проби от PE флуоресцентен сигнал.Резултатите от CD105 бяха показани (Фигура 5).
Фигура 5: CD105 резултатите от AdMSCs бяха определени от Countstar Rigel.О: Количествен анализ на положителния процент на CD105 в различни проби от FCS express 5 plus софтуер.B: Висококачествените изображения предоставят допълнителна морфологична информация.C: Валидирани резултати чрез миниатюри на всяка отделна клетка, софтуерните инструменти на FCS разделят клетките на различни групи според тяхната различна протеинова експресия.
Други резултати за антитела са показани на Фигура 6
Фигура 6: A: Представително изображение на ASC с типична вретеновидна морфология.Заснети от микроскоп OLYMPUS.Оригинално увеличение, (10x).B: Адипогенната диференциация на ASCs се доказва чрез оцветяване с рутений червено, показващо области на минерализация.Заснети от микроскоп OLYMPUS.Оригинално увеличение (10x).C: Countstar FL характеризиране на ASC.
Резюме:
Countstar FL може да наблюдава концентрацията, жизнеспособността и фенотипните характеристики (и техните промени) по време на производството и диференциацията на тези стволови клетки.FCS express предоставя функцията за преглед на всяка сигнална клетка, валидиране на данните чрез изображението.Потребителят може също да има увереността да проведе следващите експерименти въз основа на резултатите от Countstar Rigel.Countstar Rigel предлага бърз, усъвършенстван и надежден метод за контрол на качеството на стволовите клетки.
