Експериментален протокол
Процентът на цитотоксичност се изчислява по уравнението по-долу.
Цитотоксичност % = (Живо броене на контрола – Брой на живо на третираните) / Живо броене на контрола × 100
Чрез маркиране на целевите туморни клетки с нетоксичен, нерадиоактивен калцеин AM или трансфектиране с GFP, можем да наблюдаваме убиването на туморните клетки от CAR-T клетки.Докато живите целеви ракови клетки ще бъдат маркирани със зелен калцеин AM или GFP, мъртвите клетки не могат да задържат зеленото багрило.Hoechst 33342 се използва за оцветяване на всички клетки (както Т клетки, така и туморни клетки), като алтернатива, целевите туморни клетки могат да бъдат оцветени с мембранно свързан калцеин AM, PI се използва за оцветяване на мъртвите клетки (както Т клетки, така и туморни клетки).Тази стратегия за оцветяване позволява да се разграничат различни клетки.
E: T Цитотоксичност на K562, зависима от съотношението
Примерните флуоресцентни изображения на Hoechst 33342, CFSE, PI са целевите клетки на K562 при t = 3 часа
Получените флуоресцентни изображения показват увеличение на Hoechst+CFSE+PI+ целевите клетки с увеличаване на съотношението E:T
