ক্যান্সার কোষ গবেষণায় কাউন্টস্টারের অ্যাপ্লিকেশন

কাউন্টস্টার সিস্টেম ইমেজ সাইটোমিটার এবং সেল কাউন্টারকে একক বেঞ্চ-টপ ইন্সট্রুমেন্টে একত্রিত করে।এই অ্যাপ্লিকেশন-চালিত, কমপ্যাক্ট, এবং স্বয়ংক্রিয় সেল ইমেজিং সিস্টেমটি ক্যান্সার কোষ গবেষণার জন্য একটি সর্ব-ইন-ওয়ান সমাধান প্রদান করে, যার মধ্যে কোষ গণনা, কার্যকারিতা (AO/PI, ট্রিপ্যান ব্লু), অ্যাপোপটোসিস (Annexin V-FITC/PI), কোষ সহ চক্র (PI), এবং GFP/RFP ট্রান্সফেকশন।

বিমূর্ত

ক্যান্সার বিশ্বব্যাপী মৃত্যুর অন্যতম প্রধান কারণ এবং নতুন ক্যান্সার চিকিৎসা পদ্ধতির বিকাশ অত্যন্ত তাৎপর্যপূর্ণ।ক্যান্সার কোষ ক্যান্সারের মৌলিক গবেষণা বস্তু, ক্যান্সার কোষ থেকে বিভিন্ন তথ্য মূল্যায়ন করা প্রয়োজন।এই গবেষণা এলাকায় দ্রুত, নির্ভরযোগ্য, সহজ এবং বিস্তারিত কোষ বিশ্লেষণ প্রয়োজন।কাউন্টস্টার সিস্টেম ক্যান্সার কোষ বিশ্লেষণের জন্য একটি সহজ সমাধান প্ল্যাটফর্ম প্রদান করে।

কাউন্টস্টার রিগেল দ্বারা ক্যান্সার সেল অ্যাপোপটোসিস অধ্যয়ন করুন

অ্যাপোপটোসিস অ্যাসেগুলি নিয়মিতভাবে অনেক পরীক্ষাগারে কোষ সংস্কৃতির স্বাস্থ্যের মূল্যায়ন থেকে শুরু করে যৌগগুলির একটি প্যানেলের বিষাক্ততার মূল্যায়ন পর্যন্ত বিভিন্ন উদ্দেশ্যে ব্যবহৃত হয়।
অ্যাপোপটোসিস অ্যাস হল অ্যানেক্সিন ভি-এফআইটিসি/পিআই স্টেনিং পদ্ধতি দ্বারা কোষের অ্যাপোপটোসিস শতাংশ নির্ধারণের জন্য ব্যবহৃত একটি প্রকার।অ্যানেক্সিন ভি প্রারম্ভিক অ্যাপোপটোসিস কোষ বা নেক্রোসিস কোষের সাথে ফসফ্যাটিডিলসারিন (পিএস) এর সাথে আবদ্ধ হয়।PI শুধুমাত্র নেক্রোটিক/খুব দেরী পর্যায়ের অ্যাপোপটোটিক কোষে প্রবেশ করে।(চিত্র 1)

এ: প্রারম্ভিক অ্যাপোপটোসিস অ্যানেক্সিন ভি (+), পিআই (-)

বি: দেরী অ্যাপোপটোসিস অ্যানেক্সিন ভি (+), পিআই (+)

চিত্র 1: Annexin V FITC এবং PI দিয়ে চিকিত্সা করা 293 কোষের কাউন্টস্টার রিগেল ছবির (5 x বড়করণ) বর্ধিত বিবরণ

ক্যান্সার কোষের কোষ চক্র বিশ্লেষণ

কোষ চক্র বা কোষ-বিভাজন চক্র হল একটি কোষে সংঘটিত ঘটনার সিরিজ যা এর বিভাজন এবং এর DNA (DNA প্রতিলিপি) এর নকল করে দুটি কন্যা কোষ তৈরি করে।নিউক্লিয়াস সহ কোষগুলিতে, ইউক্যারিওটসের মতো, কোষ চক্রও তিনটি পর্যায় বিভক্ত: ইন্টারফেজ, মাইটোটিক (এম) ফেজ এবং সাইটোকাইনেসিস।প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI) হল একটি নিউক্লিয়ার স্টেনিং ডাই যা প্রায়শই কোষ চক্র পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়।যেহেতু রঞ্জক জীবন্ত কোষে প্রবেশ করতে পারে না, কোষগুলি দাগ দেওয়ার আগে ইথানল দিয়ে স্থির করা হয়।সমস্ত কোষ তারপর দাগ হয়.বিভাজনের জন্য প্রস্তুত কোষগুলিতে ডিএনএর ক্রমবর্ধমান পরিমাণ থাকবে এবং আনুপাতিকভাবে বর্ধিত ফ্লুরোসেন্স প্রদর্শন করবে।ফ্লুরোসেন্স তীব্রতার পার্থক্যগুলি কোষ চক্রের প্রতিটি পর্যায়ে কোষের শতাংশ নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়।কাউন্টস্টার ছবিটি ক্যাপচার করতে পারে এবং ফলাফলগুলি FCS এক্সপ্রেস সফ্টওয়্যারে প্রদর্শিত হবে।(চিত্র ২)

চিত্র 2: MCF-7 (A) এবং 293T (B) PI সহ সেল চক্র সনাক্তকরণ কিট দিয়ে দাগযুক্ত ছিল, ফলাফলগুলি কাউন্টস্টার রিগেল দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল এবং এফসিএস এক্সপ্রেস দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

কোষে কার্যক্ষমতা এবং GFP স্থানান্তর নির্ধারণ

বায়োপ্রসেস চলাকালীন, জিএফপি প্রায়শই একটি সূচক হিসাবে রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনের সাথে ফিউজ করতে ব্যবহৃত হয়।GFP ফ্লুরোসেন্ট নির্ধারণ করুন লক্ষ্য প্রোটিন অভিব্যক্তি প্রতিফলিত করতে পারে.কাউন্টস্টার রিগেল জিএফপি ট্রান্সফেকশনের পাশাপাশি কার্যকারিতা পরীক্ষা করার জন্য একটি দ্রুত এবং সহজ পরীক্ষা প্রদান করে।মৃত কোষের জনসংখ্যা এবং মোট কোষের জনসংখ্যা নির্ধারণের জন্য কোষগুলিকে প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI) এবং Hoechst 33342 দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল।Countstar Rigel একই সময়ে GFP এক্সপ্রেশন দক্ষতা এবং কার্যকারিতা মূল্যায়ন করার জন্য একটি দ্রুত, পরিমাণগত পদ্ধতি অফার করে।(চিত্র 4)

চিত্র 4: Hoechst 33342 (নীল) ব্যবহার করে কোষগুলি অবস্থিত এবং GFP প্রকাশকারী কোষগুলির শতাংশ (সবুজ) সহজেই নির্ধারণ করা যেতে পারে।অব্যর্থ কোষ প্রপিডিয়াম আয়োডাইড (PI; লাল) দিয়ে দাগযুক্ত।

কার্যক্ষমতা এবং কোষ গণনা

AO/PI ডুয়াল-ফ্লোরেসেস গণনা হল কোষের ঘনত্ব, কার্যকারিতা সনাক্ত করার জন্য ব্যবহৃত অ্যাসের ধরন।এটি বিভিন্ন কোষের ধরন অনুসারে সেল লাইন গণনা এবং প্রাথমিক কোষ গণনায় বিভক্ত।দ্রবণটিতে সবুজ-ফ্লুরোসেন্ট নিউক্লিক অ্যাসিড দাগ, অ্যাক্রিডিন কমলা এবং রেডফ্লুরোসেন্ট নিউক্লিক অ্যাসিড দাগ, প্রোপিডিয়াম আয়োডাইডের সংমিশ্রণ রয়েছে।প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড হল একটি ঝিল্লি বর্জন রঞ্জক যা শুধুমাত্র আপোসকৃত ঝিল্লির কোষে প্রবেশ করে যখন অ্যাক্রিডিন কমলা জনসংখ্যার সমস্ত কোষে প্রবেশ করে।যখন উভয় রঞ্জক নিউক্লিয়াসে উপস্থিত থাকে, তখন প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড ফ্লুরোসেন্স রেজোন্যান্স এনার্জি ট্রান্সফার (FRET) দ্বারা অ্যাক্রিডাইন কমলা প্রতিপ্রভা হ্রাস করে।ফলস্বরূপ, অক্ষত ঝিল্লি সহ নিউক্লিয়েটেড কোষগুলি ফ্লুরোসেন্ট সবুজ দাগ দেয় এবং লাইভ হিসাবে গণনা করা হয়, যেখানে আপোসকৃত ঝিল্লি সহ নিউক্লিয়েটেড কোষগুলি কেবল ফ্লুরোসেন্ট লাল দাগ দেয় এবং কাউন্টস্টার রিগেল সিস্টেম ব্যবহার করার সময় মৃত হিসাবে গণনা করা হয়।লোহিত রক্ত ​​কণিকা, প্লেটলেট এবং ধ্বংসাবশেষের মতো অ-নিউক্লিয়েটেড উপাদান ফ্লুরোস হয় না এবং কাউন্টস্টার রিগেল সফ্টওয়্যার দ্বারা উপেক্ষা করা হয়।(চিত্র 5)

চিত্র 5: কাউন্টস্টার PBMC ঘনত্ব এবং কার্যকারিতার সহজ, সঠিক সংকল্পের জন্য একটি ডুয়াল-ফ্লুরোসেন্স স্টেনিং পদ্ধতি অপ্টিমাইজ করেছে।AO/PI দিয়ে দাগযুক্ত নমুনাগুলি Counstar Rigel দিয়ে বিশ্লেষণ করা যেতে পারে