একটি অভিনব ইমেজিং সাইটোমেট ব্যবহার করে স্টেম সেলের সরাসরি ঘনত্ব, কার্যক্ষমতা এবং ফিনোটাইপ পরিমাপ

বিমূর্ত: মেসেনকাইমাল স্টেম সেল হল প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেলগুলির একটি উপসেট যা মেসোডার্ম থেকে বিচ্ছিন্ন করা যেতে পারে।তাদের স্ব-প্রতিলিপি পুনর্নবীকরণ এবং বহু-দিক ভিন্নতা বৈশিষ্ট্যের সাথে, তারা ওষুধের বিভিন্ন থেরাপির উচ্চ সম্ভাবনার অধিকারী।মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলির একটি অনন্য ইমিউন ফিনোটাইপ এবং ইমিউন নিয়ন্ত্রণ ক্ষমতা রয়েছে।অতএব, মেসেনকাইমাল স্টেম সেল ইতিমধ্যেই স্টেম সেল প্রতিস্থাপন, টিস্যু ইঞ্জিনিয়ারিং এবং অঙ্গ প্রতিস্থাপনে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।এবং এই অ্যাপ্লিকেশনগুলির বাইরে, এগুলি মৌলিক এবং ক্লিনিকাল গবেষণা পরীক্ষার একটি সিরিজে বীজ কোষ হিসাবে টিস্যু ইঞ্জিনিয়ারিংয়ের একটি আদর্শ হাতিয়ার হিসাবে ব্যবহৃত হয়।এখন পর্যন্ত, মেসেনকাইমাল স্টেম সেলের মান নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি ব্যাপকভাবে স্বীকৃত পদ্ধতি এবং মান নেই।কাউন্টস্টার রিগেল এই স্টেম সেলগুলির উত্পাদন এবং পার্থক্যের সময় ঘনত্ব, কার্যকারিতা এবং ফেনোটাইপ বৈশিষ্ট্যগুলি (এবং তাদের পরিবর্তনগুলি) নিরীক্ষণ করতে পারে।কাউন্টস্টার রিগেল কোষের গুণমান পর্যবেক্ষণের পুরো প্রক্রিয়া চলাকালীন স্থায়ী ব্রাইটফিল্ড এবং ফ্লুরোসেন্স-ভিত্তিক ইমেজ রেকর্ডিং দ্বারা প্রদত্ত অতিরিক্ত রূপগত তথ্য পাওয়ার ক্ষেত্রেও সুবিধা রয়েছে।কাউন্টস্টার রিগেল স্টেম সেলের মান নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি দ্রুত, পরিশীলিত এবং নির্ভরযোগ্য পদ্ধতি অফার করে।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ:
অ্যাডিপোজ-প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (এডিএমএসসি) প্রফেসর নিয়ানমিন কিউই, এও/পিআই স্টেনিং সলিউশন (সাংহাই রুইইউ, সিএফ০০২) দ্বারা উপহার দেওয়া হয়েছিল।অ্যান্টিবডি: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD কোম্পানি)।
AdMSCs একটি 37℃, 5% CO2 আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরে সংস্কৃত করা হয়েছিল।ব্যবহারের আগে ট্রিপসিন দিয়ে ডাইজেস্ট করুন।
সিডি মার্কার স্টেনিং পদ্ধতিটি অ্যান্টিবডির ম্যানুয়াল হিসাবে অনুসরণ করা হয়েছিল।
কাউন্টস্টার রিগেলের সাথে সিডি মার্কার সনাক্তকরণ:
1. একটি সংকেত-রঙের প্রয়োগ পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছিল PE চ্যানেলকে ইমেজ PE ফ্লুরোসেন্সে সেট করে।
2. প্রতিটি চেম্বার থেকে 3টি ক্ষেত্র ক্যাপচার করা হয়েছিল।
3. ইমেজিং এবং প্রাথমিক বিশ্লেষণ সম্পূর্ণ হওয়ার পরে, FCS সফ্টওয়্যার দ্বারা ইতিবাচক এবং নেতিবাচক স্থানান্তরের জন্য থ্রেশহোল্ড (লগ গেট) সেটিং সেট করা হয়েছিল।

স্টেম সেলের গুণমান নিয়ন্ত্রণ
নিম্নলিখিত চিত্র (চিত্র 1) এর পদ্ধতি দেখায় স্টেম সেল থেরাপি .

চিত্র 1: স্টেম সেল থেরাপির পদ্ধতি

ফলাফল:
AdMSC-এর ঘনত্ব, কার্যক্ষমতা, ব্যাস এবং সমষ্টি নির্ধারণ করা।
AdMSC-এর কার্যকারিতা AO/PI দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল, একটি দ্বৈত-রঙের আবেদন পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছিল সবুজ চ্যানেল এবং লাল চ্যানেলকে চিত্র AO এবং PI ফ্লুরোসেন্স, এবং একটি উজ্জ্বল ক্ষেত্র সেট করে।উদাহরণ চিত্রগুলি চিত্র 2 এ দেখানো হয়েছে।

চিত্র 2. অ্যাডএমএসসি পরিবহনের আগে এবং পরিবহনের পরে ছবি।উ: পরিবহনের আগে;একটি প্রতিনিধি চিত্র দেখানো হয়েছে।B. পরিবহনের পরে;একটি প্রতিনিধি চিত্র দেখানো হয়েছে।

পরিবহনের পূর্বের সাথে তুলনা করলে পরিবহণের পরে AdMSC-এর কার্যকারিতা ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়।পরিবহনের আগে কার্যকারিতা ছিল 92%, কিন্তু পরিবহনের পরে তা কমে 71% এ নেমে আসে।ফলাফল চিত্র 3 এ দেখানো হয়েছে।

চিত্র 3. AdMSC-এর কার্যকারিতা ফলাফল (পরিবহনের আগে এবং পরিবহনের পরে)

ব্যাস এবং সমষ্টিও কাউন্টস্টার রিগেল দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল।পরিবহনের পূর্বের সাথে তুলনা করলে পরিবহণের পরে AdMSC-এর ব্যাস ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়।পরিবহনের আগে ব্যাস ছিল 19µm, কিন্তু পরিবহনের পর তা বেড়ে 21µm হয়েছে।পরিবহনের পূর্বের সমষ্টি ছিল 20%, কিন্তু পরিবহণের পরে তা বেড়ে 25% হয়েছে।কাউন্টস্টার রিগেল দ্বারা ধারণ করা চিত্রগুলি থেকে, পরিবহনের পরে অ্যাডএমএসসির ফেনোটাইপ ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়েছিল।ফলাফল চিত্র 4 দেখানো হয়েছে.

চিত্র 4: ব্যাস এবং সমষ্টির ফলাফল।উত্তর: AdMSC-এর প্রতিনিধি চিত্র, AdMSC-এর ফিনোটাইপ পরিবহনের পরে ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়েছিল।বি: পরিবহনের পূর্বে একত্রীকরণ ছিল 20%, কিন্তু পরিবহনের পরে তা বেড়ে 25% হয়েছে।C: পরিবহনের আগে ব্যাস ছিল 19µm, কিন্তু পরিবহনের পর তা 21µm-এ বেড়ে যায়।

Countstar Rigel দ্বারা AdMSC-এর ইমিউনোফেনোটাইপ নির্ধারণ করুন
AdMSC-এর ইমিউনোফেনোটাইপ কাউন্টস্টার রিগেল দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল, AdMSC গুলি যথাক্রমে বিভিন্ন অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR)।ইমেজ PE ফ্লুরোসেন্স, এবং একটি উজ্জ্বল ক্ষেত্র হিসাবে একটি সবুজ চ্যানেল সেট করে একটি সংকেত-রঙ অ্যাপ্লিকেশন পদ্ধতি তৈরি করা হয়েছিল।PE ফ্লুরোসেন্স সিগন্যাল নমুনা করার জন্য উজ্জ্বল ক্ষেত্র ছবির রেফারেন্স বিভাজন একটি মুখোশ হিসাবে প্রয়োগ করা হয়েছিল।CD105 এর ফলাফল দেখানো হয়েছে (চিত্র 5)।

চিত্র 5: AdMSC-এর CD105 ফলাফল কাউন্টস্টার রিগেল দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল।উত্তর: এফসিএস এক্সপ্রেস 5 প্লাস সফ্টওয়্যার দ্বারা বিভিন্ন নমুনায় CD105 এর ইতিবাচক শতাংশের পরিমাণগত বিশ্লেষণ।বি: উচ্চ-মানের ছবি অতিরিক্ত রূপগত তথ্য সরবরাহ করে।C: প্রতিটি একক কোষের থাম্বনেইল দ্বারা যাচাইকৃত ফলাফল, এফসিএস সফ্টওয়্যার সরঞ্জামগুলি তাদের বিভিন্ন প্রোটিন অভিব্যক্তি অনুসারে কোষগুলিকে বিভিন্ন গ্রুপে বিভক্ত করেছে।

অন্যান্য অ্যান্টিবডি ফলাফল চিত্র 6 এ দেখানো হয়েছিল

চিত্র 6: A: সাধারণ টাকু-আকৃতির আকারবিদ্যা সহ ASC-এর একটি প্রতিনিধি চিত্র।অলিম্পাস মাইক্রোস্কোপ দ্বারা বন্দী।আসল বিবর্ধন, (10x)।B: ASC-এর অ্যাডিপোজেনিক পার্থক্য খনিজকরণের ক্ষেত্রগুলিকে দেখানো রুথেনিয়াম রেড স্টেনিং দ্বারা প্রমাণিত হয়।অলিম্পাস মাইক্রোস্কোপ দ্বারা বন্দী।আসল বিবর্ধন (10x)।C: ASC-এর কাউন্টস্টার FL চরিত্রায়ন।

সারসংক্ষেপ:
কাউন্টস্টার এফএল এই স্টেম কোষগুলির উত্পাদন এবং পার্থক্যের সময় ঘনত্ব, কার্যকারিতা এবং ফিনোটাইপ বৈশিষ্ট্যগুলি (এবং তাদের পরিবর্তনগুলি) নিরীক্ষণ করতে পারে।এফসিএস এক্সপ্রেস প্রতিটি সিগন্যাল সেল পর্যালোচনা করার ফাংশন সরবরাহ করে, চিত্রের মাধ্যমে ডেটা যাচাই করে।কাউন্টস্টার রিগেল ফলাফলের উপর ভিত্তি করে পরবর্তী পরীক্ষাগুলি চালানোর জন্য ব্যবহারকারীর আত্মবিশ্বাসও থাকতে পারে।কাউন্টস্টার রিগেল স্টেম সেলের মান নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি দ্রুত, পরিশীলিত এবং নির্ভরযোগ্য পদ্ধতি অফার করে।