Countstar sistem kombinuje slikovni citometar i brojač ćelija u jedan stoni instrument.Ovaj kompaktni i automatizirani sistem za snimanje ćelija vođen aplikacijama pruža sveobuhvatno rješenje za istraživanje ćelija raka, uključujući brojanje ćelija, održivost (AO/PI, tripan plavo), apoptozu (aneksin V-FITC/PI), ćeliju ciklus (PI) i GFP/RFP transfekcija.
Abstract
Rak je jedan od glavnih uzroka smrti širom svijeta, a razvoj novih metoda liječenja raka je od velikog značaja.Ćelija raka je osnovni predmet istraživanja raka, iz ćelije raka treba procijeniti različite informacije.Ovo područje istraživanja zahtijeva brzu, pouzdanu, jednostavnu i detaljnu analizu ćelija.Countstar sistem pruža jednostavnu platformu rješenja za analizu ćelija raka.
Proučite apoptozu ćelija raka od strane Countstara Rigela
Testovi apoptoze se rutinski koriste u mnogim laboratorijama u različite svrhe, od procjene zdravlja ćelijskih kultura do procjene toksičnosti panela spojeva.
Test apoptoze je tip koji se koristi za određivanje procenta apoptoze ćelija metodom bojenja Aneksinom V-FITC/PI.Aneksin V se veže za fosfatidilserin (PS) sa ćelijom rane apoptoze ili ćelijom nekroze.PI ulazi samo u nekrotične/vrlo kasne apoptotičke ćelije.(Slika 1)
A: Rana apoptoza Aneksin V (+), PI (-)
B: Kasna apoptoza Aneksin V (+), PI (+)
Slika 1: Uvećani detalji slika Countstar Rigel (5x uvećanje) od 293 ćelije, tretirane Aneksinom V FITC i PI
Analiza ćelijskog ciklusa ćelije raka
Ćelijski ciklus ili ciklus ćelijske diobe je niz događaja koji se odvijaju u ćeliji koji dovode do njezine diobe i umnožavanja DNK (replikacija DNK) kako bi se dobile dvije kćeri ćelije.U ćelijama sa jezgrom, kao i kod eukariota, ćelijski ciklus je takođe podeljen na tri perioda: interfazu, mitotičku (M) fazu i citokinezu.Propidijum jodid (PI) je boja za nuklearno bojenje koja se često koristi za merenje ćelijskog ciklusa.Budući da boja ne može ući u žive ćelije, ćelije se fiksiraju etanolom prije bojenja.Sve ćelije su tada obojene.Ćelije koje se pripremaju za diobu će sadržavati sve veće količine DNK i pokazivat će proporcionalno povećanu fluorescenciju.Razlike u intenzitetu fluorescencije koriste se za određivanje procenta ćelija u svakoj fazi ćelijskog ciklusa.Countstar može snimiti sliku i rezultati će biti prikazani u FCS express softveru.(Slika 2)
Slika 2: MCF-7 (A) i 293T (B) su obojeni kompletom za detekciju ćelijskog ciklusa sa PI, rezultate je odredio Countstar Rigel i analizirali FCS expressom.
Određivanje održivosti i GFP transfekcije u ćeliji
Tokom bioprocesa, GFP se često koristi za spajanje sa rekombinantnim proteinom kao indikatorom.Odredite da GFP fluorescentno može odražavati ekspresiju ciljnog proteina.Countstar Rigel nudi brz i jednostavan test za testiranje GFP transfekcije kao i održivosti.Ćelije su obojene propidijum jodidom (PI) i Hoechst 33342 da bi se odredila populacija mrtvih ćelija i ukupna ćelijska populacija.Countstar Rigel nudi brzu, kvantitativnu metodu za procenu efikasnosti i održivosti GFP ekspresije u isto vreme.(Slika 4)
Slika 4: Ćelije su locirane koristeći Hoechst 33342 (plavo) i postotak ćelija koje eksprimiraju GFP (zeleno) može se lako odrediti.Nežive ćelije su obojene propidijum jodidom (PI; crveno).
Viabilnost i broj ćelija
AO/PI Dvostruko fluorescentno brojanje je tip testa koji se koristi za otkrivanje koncentracije i vitalnosti ćelija.Podijeljeno je na brojanje ćelijskih linija i primarno brojanje ćelija prema različitim tipovima ćelija.Otopina sadrži kombinaciju zeleno-fluorescentne boje nukleinske kiseline, akridin narandže i crvene fluorescentne boje nukleinske kiseline, propidijum jodida.Propidijum jodid je membranska ekskluziona boja koja ulazi samo u ćelije sa ugroženim membranama, dok akridin narandžasta prodire u sve ćelije u populaciji.Kada su obe boje prisutne u jezgru, propidijum jodid uzrokuje smanjenje akridin narandžaste fluorescencije putem fluorescentnog rezonantnog prenosa energije (FRET).Kao rezultat toga, ćelije sa jezgrom sa netaknutim membranama boje se fluorescentno zelenom bojom i računaju se kao žive, dok ćelije sa jezgrom sa ugroženim membranama boje samo fluorescentno crveno i računaju se kao mrtve kada se koristi Countstar Rigel sistem.Materijali bez jezgre kao što su crvena krvna zrnca, trombociti i ostaci ne fluoresciraju i Countstar Rigel softver ih ignorira.(Slika 5)
Slika 5: Countstar je optimizirao metodu dvostruke fluorescencije za jednostavno, precizno određivanje koncentracije i održivosti PBMC.Uzorci obojeni AO/PI mogu se analizirati sa Counstar Rigelom
