Eksperimentalni protokol
% citotoksičnosti izračunava se prema donjoj jednadžbi.
Citotoksičnost % = (živi broj kontrole – živi broj tretiranih) / živi broj kontrole × 100
Obilježavanjem ciljnih tumorskih stanica netoksičnim, neradioaktivnim kalceinom AM ili transfektacijom GFP-om, možemo pratiti ubijanje tumorskih stanica od strane CAR-T stanica.Dok će žive ciljne ćelije raka biti označene zelenim kalceinom AM ili GFP, mrtve ćelije ne mogu zadržati zelenu boju.Hoechst 33342 se koristi za bojenje svih ćelija (i T ćelija i tumorskih ćelija), alternativno, ciljne tumorske ćelije se mogu bojiti membranski vezanim kalceinom AM, PI se koristi za bojenje mrtvih ćelija (i T ćelija i tumorskih ćelija).Ova strategija bojenja omogućava razlikovanje različitih ćelija.
E: T Citotoksičnost K562 zavisna od omjera
Primjer Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescentne slike su K562 ciljne ćelije na t = 3 sata
Rezultirajuće fluorescentne slike pokazale su povećanje Hoechst+CFSE+PI+ ciljnih ćelija kako se povećavao omjer E:T
