El recompte de fluorescències dual AOPI és el tipus d'assaig utilitzat per detectar la concentració i la viabilitat cel·lular.La solució és una combinació de taronja d'acridina (la taca d'àcid nucleic fluorescent verd) i iodur de propidi (la taca d'àcid nucleic fluorescent vermell).El iodur de propidi (PI) és un colorant d'exclusió de membrana que només entra a les cèl·lules amb membranes compromeses, mentre que la taronja d'acridina és capaç de penetrar totes les cèl·lules d'una població.Quan els dos colorants estan presents al nucli, el iodur de propidi provoca una reducció de la fluorescència taronja d'acridina mitjançant la transferència d'energia de ressonància de fluorescència (FRET).Com a resultat, les cèl·lules nucleades amb membranes intactes es taquen de color verd fluorescent i es compten com a vives, mentre que les cèl·lules nucleades amb membranes compromeses només es taquen de vermell fluorescent i es compten com a mortes quan s'utilitzen el sistema Countstar® FL.El material no nuclear com els glòbuls vermells, les plaquetes i els residus no emet fluorescència i el programari Countstar® FL ignora.
Procés de teràpia amb cèl·lules mare
Figura 4 Monitorització de la viabilitat i el recompte cel·lular de cèl·lules mare mesenquimals (MSC) per al seu ús en teràpies cel·lulars.
Determineu la viabilitat de MSC mitjançant un assaig AO/PI i Trypan Blue
Figura 2. A. Imatge de MSC tenyida per AO/PI i Trypan Blue;2. Comparació del resultat AO/PI i el blau tripà abans i després del transport.
L'índex de refracció cel·lular canvia, la tinció de blau tripà no era tan òbvia, és difícil determinar la viabilitat després del transport.Tot i que la fluorescència de doble color permet la tinció de cèl·lules nucleades vives i mortes, la generació de resultats de viabilitat precisos fins i tot en presència de restes, plaquetes i glòbuls vermells.
