Ang pag-analisar sa mga leukocyte sa tibuok dugo usa ka naandan nga pagsulay sa clinical lab o blood bank.Ang konsentrasyon ug kalagsik sa mga leukocyte mao ang hinungdanon nga indeks isip pagkontrol sa kalidad sa pagtipig sa dugo.Gawas sa leukocyte, ang tibuok dugo adunay daghang platelet, pula nga mga selula sa dugo, o cellular debris, nga naghimo niini nga imposible ang pag-analisar sa tibuok dugo direkta ubos sa mikroskopyo o bright field cell counter.Ang naandan nga mga pamaagi sa pag-ihap sa puti nga mga selyula sa dugo naglakip sa proseso sa lysis sa RBC, nga nag-usik sa panahon.
Ang pag-ihap sa AOPI Dual-fluoresces mao ang tipo sa assay nga gigamit alang sa pag-ila sa konsentrasyon sa cell ug pagkaayo.Ang solusyon mao ang kombinasyon sa acridine orange (ang green-fluorescent nucleic acid stain) ug propidium iodide (ang red-fluorescent nucleic acid stain).Ang propidium iodide (PI) kay usa ka lamad nga exclusion dye nga musulod lang sa mga cell nga naay compromised membranes, samtang ang acridine orange kay makasulod sa tanang cell sa usa ka populasyon.Kung ang duha ka tina anaa sa nucleus, ang propidium iodide hinungdan sa pagkunhod sa acridine orange fluorescence pinaagi sa fluorescence resonance energy transfer (FRET).Ingon usa ka sangputanan, ang mga nucleated nga mga selyula nga adunay wala’y sulod nga mga lamad nagmantsa sa fluorescent nga berde ug giisip nga buhi, samtang ang mga nucleated nga mga selyula nga adunay nakompromiso nga mga lamad nagmantsa ra sa pula nga fluorescent ug giisip nga patay kung gigamit ang sistema sa Countstar® Rigel.
Ang Countstar Rigel usa ka sulundon nga solusyon alang sa daghang mga komplikado nga pag-ila sa populasyon sa cell nga mga assay, makapaarang sa paspas nga pag-analisar sa mga white-blood-cell sa tibuuk nga dugo.
Eksperimental nga Pamaagi:
1. Pagkuha ug 20 µl nga sample sa dugo ug lasaw ang sample sa 180 µl sa PBS.
2. Idugang ang 12µl AO/PI nga solusyon sa 12µl sample, hinayhinay nga gisagol sa pipette;
3. Pagdrowing og 20µl mixture ngadto sa chamber slide;
4. Tugoti ang mga selula sa paghusay sa lawak sulod sa 1 ka minuto;
5. Insect ang slide ngadto sa Countstar FL instrument;
6. Pilia ang “AO/PI Viability” assay, unya Enter Sample ID para niini nga sample.
7.Select Dilution ratio, Cell Type, ang pag-klik sa 'Run' aron masugdan ang pagsulay.
Pasidaan: Ang AO ug PI usa ka potensyal nga carcinogen.Girekomenda nga ang operator magsul-ob ug personal protective equipment (PPE) aron malikayan ang direktang kontak sa panit ug mata.
Resulta:
1. Bright Field Image sa tibuok dugo
Sa hayag nga field image sa tibuok dugo, ang WBC's dili makita sa red blood cell.(Hulagway 1)
Figure 1 Mahayag nga hulagway sa uma sa tibuok dugo.
2. Fluorescence Imahe sa tibuok dugo
Ang AO ug PI nga tina kay parehong mantsa sa DNA sa cell nucleus sa mga selula.Busa, ang mga platelet, pula nga mga selula sa dugo, o cellular debris dili makaapektar sa konsentrasyon sa leukocyte ug resulta sa viability.Ang buhi nga mga leukocyte (Berde) ug patay nga mga leukocyte (Pula) dali nga makita sa mga hulagway sa fluorescence.(Hulagway 2)
Figure 2 Fluorescence Mga hulagway sa tibuok dugo.(A).Hulagway sa AO Channel;(B) Hulagway sa PI Channel;(C) Paghiusa sa mga hulagway sa AO ug PI Channel.
3. Konsentrasyon ug viability sa leukocytes
Ang software sa Countstar FL awtomatik nga nag-ihap sa mga selula sa tulo ka mga seksiyon sa lawak ug nagkalkulo sa kasagarang bili sa kinatibuk-ang ihap sa selula sa WBC (1202), konsentrasyon (1.83 x 106 ka selula/ml), ug % viability (82.04%).Ang tibuok dugo nga mga hulagway ug data daling ma-export isip PDF, Image o Excel para sa dugang nga pagtuki o pag-archive sa datos.
Figure 3 Screenshot sa Countstar Rigel Software
