U sistema Countstar combina u citometru di l'imaghjini è u contatore di cellule in un unicu strumentu da banco.Stu sistema d'imaghjini di cellula guidatu da l'applicazione, compactu è automatizatu furnisce una soluzione all-in-one per a ricerca di e cellule cancerose, cumprese u conte di cellule, a viabilità (AO/PI, trypan blue), l'apoptosi (Annexin V-FITC/PI), a cellula. ciclo (PI) e trasfezione GFP/RFP.
Astrattu
U cancer hè una di e cause principali di morte in u mondu, è u sviluppu di novi metudi di trattamentu di u cancer hè di grande significazione.A cellula di u cancer hè l'ughjettu di ricerca di basa di u cancer, diverse infurmazione deve esse evaluata da a cellula di u cancer.Questa zona di ricerca hà bisognu di una analisi cellulare rapida, affidabile, simplice è dettagliata.U sistema Countstar furnisce una piattaforma di suluzione simplice per l'analisi di e cellule cancerose.
Studia l'apoptosi di e cellule cancerose da Countstar Rigel
L'analisi di l'apoptosi sò generalmente usate in parechji laboratori per varii scopi, da a valutazione di a salute di i culturi di cellule à a valutazione di a toxicità di un pannellu di composti.
L'analisi di apoptosi hè un tipu utilizatu per a determinazione di u percentualità di apoptosi di e cellule da u metudu di tintura Annexin V-FITC/PI.L'annessina V si lega alla fosfatidilserina (PS) con cellule di apoptosi precoce o cellule di necrosi.PI entra solu in e cellule necrotiche/apoptotiche assai tardive.(Figura 1)
A: Apoptosi precoce Annexin V (+), PI (-)
B: apoptosi tardiva Annexin V (+), PI (+)
Figura 1: Dettagli ingranditi di stampe Countstar Rigel (ingrandimentu 5 x) di 293 cellule, trattate cù Annexin V FITC è PI
Analisi di u Ciclu Cellulare di a Cella di Cancer
U ciculu di a cellula o ciculu di divisione cellula hè a seria di avvenimenti chì si facenu in una cellula chì porta à a so divisione è a duplicazione di u so DNA (replicazione di DNA) per pruduce duie cellule figliole.In e cellule cun un nucleu, cum'è in l'eucarioti, u ciculu cellulare hè ancu divisu in trè periodi: interfase, a fase mitotica (M) è citocinesi.L'ioduru di propidium (PI) hè un colorante di tintura nucleare chì hè spessu usatu per misurà u ciculu cellulare.Perchè u tintu ùn pò micca entra in e cellule vive, e cellule sò fissate cù etanolu prima di a tintura.Allora tutte e cellule sò macchiate.E cellule chì si preparanu per a divisione cuntenenu quantità crescente di DNA è mostranu una fluorescenza proporzionalmente aumentata.Differenze in l'intensità di fluorescenza sò usate per determinà u percentualità di cellule in ogni fase di u ciculu cellulare.Countstar pò catturà l'imaghjini è i risultati seranu visualizati in u software FCS express.(Figura 2)
Figura 2: MCF-7 (A) è 293T (B) sò stati macchiati cù u Kit di Detezzione di u ciculu cellulare cù PI, i risultati sò stati determinati da Countstar Rigel, è analizati da FCS express.
Determinazione di Viabilità è Trasfezione di GFP in Cell
Duranti u bioprocessu, GFP hè spessu usatu per fusione cù a proteina recombinante cum'è un indicatore.Determina a fluorescenza GFP pò riflette l'espressione di a proteina di destinazione.Countstar Rigel offre un test rapidu è simplice per pruvà a trasfezzione di GFP è a viabilità.Les cellules ont été colorées avec l'iodure de Propidium (PI) et Hoechst 33342 pour définir la population de cellules mortes et la population totale de cellules.Countstar Rigel offre un metudu rapidu è quantitatu per evaluà l'efficienza di l'espressione GFP è a viabilità à u stessu tempu.(Figura 4)
Figura 4: E cellule sò situate cù Hoechst 33342 (blu) è u percentualità di e cellule chì esprimenu GFP (verde) ponu esse facilmente determinate.Les cellules non viables sont colorées avec iodure de propidium (PI; rouge).
Viabilità è conte di Cellule
AO/PI Dual-fluoresces counting hè u tippu di analisi utilizatu per detectà a cuncentrazione di e cellule, a viabilità.Hè divisu in u cuntu di a linea cellulare è u cuntu di e cellule primarie secondu u tipu di cellula differente.A suluzione cuntene una cumminazzioni di a macchia di l'acidu nucleicu verde-fluorescent, l'aranciu acridina, è a macchia di l'acidu nucleicu fluorescente, l'ioduru di propidium.L'ioduru di propidium hè un colorante d'esclusione di a membrana chì entra solu in e cellule cù membrani compromessi mentre l'acridine orange penetra in tutte e cellule di una populazione.Quandu i dui tinti sò prisenti in u nucleu, l'ioduru di propidium provoca una riduzzione di a fluoriscenza acridina aranciu da u trasferimentu di l'energia di risonanza di fluorescenza (FRET).In u risultatu, e cellule nucleate cù membrani intacte macchianu di verde fluorescente è sò cuntate cum'è vivi, mentre chì e cellule nucleate cù membrani cumprumessi sò macchiate solu di rossu fluorescente è sò cuntate cum'è morte quandu utilizanu u sistema Countstar Rigel.U materiale non-nucleatu, cum'è i globuli rossi, i platelets è i detriti ùn sò micca fluorescenti è sò ignorati da u software Countstar Rigel.(Figura 5)
Figura 5: Countstar hà ottimizatu un metudu di tintura di doppia fluorescenza per a determinazione simplice è precisa di a cuncentrazione è a viabilità di PBMC.I campioni macchiati cù AO/PI ponu esse analizati cù u Counstar Rigel
