Abstract: E cellule staminali mesenchimali sò un sottogruppu di cellule staminali pluripotenti chì ponu esse isolate da u mesoderma.Cù u so rinuvamentu di l'autoreplicazione è e caratteristiche di differenziazione multidirezzione, pussede un altu potenziale per diverse terapie in medicina.E cellule staminali mesenchimali anu un fenotipu immune unicu è una capacità di regulazione immune.Dunque, e cellule staminali mesenchimali sò digià largamente usate in trasplante di cellule staminali, ingegneria di tissuti è trasplante d'urgani.E Al di là di queste applicazioni, sò usati cum'è un strumentu ideale in l'ingegneria di tissuti cum'è cellule di semina in una seria di esperimenti di ricerca basica è clinica.Finu à avà, ùn ci hè micca un metudu è standard largamente accettatu per u cuntrollu di qualità di e cellule staminali mesenchimali.U Countstar Rigel pò monitorà a cuncentrazione, a viabilità è e caratteristiche di u fenotipu (è i so cambiamenti) durante a produzzione è a differenziazione di sti cellule staminali.U Countstar Rigel hà ancu u vantaghju di ottene infurmazione morfologica supplementaria, furnita da e registrazioni di l'imaghjini di u campu luminoso permanente è basati in fluorescenza durante tuttu u prucessu di monitoraghju di a qualità cellulare.U Countstar Rigel offre un metudu rapidu, sofisticatu è affidabile per u cuntrollu di qualità di e cellule staminali.
Materiali è metudi:
E cellule staminali mesenchimali adipose-derivate (AdMSCs) sò state dotate da u prufessore Nianmin Qi, suluzione di tintura AO / PI (Shanghai RuiYu, CF002).Antibody: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
L'AdMSC sò stati cultivati in un incubatore umidificatu à 37 ℃, 5% CO2.Digerite cù tripsina prima di l'usu.
A prucedura di tintura di marcatura CD hè stata seguita cum'è u manuale di l'anticorpu.
Rilevazione di marcatori CD cù Countstar Rigel:
1. A prucedura di applicazione signal-color hè stata creata da mette u canali PE à l'imaghjini di fluoriscenza PE.
2. 3 campi sò stati catturati da ogni camara.
3. Dopu chì l'imaghjini è l'analisi iniziale sò stati cumpleti, u limitu (log gate) paràmetru per a trasfezzione positiva è negativa hè stata stabilita da u software FCS.
Controlu di qualità di e cellule staminali
A figura seguente (Figura 1) mostra a prucedura di terapia di cellule staminali .
Figura 1: A prucedura per a terapia di cellule staminali
Risultati:
Determinà a cuncentrazione, a viabilità, u diametru è l'agregazione di AdMSC.
A viabilità di l'AdMSCs hè stata determinata da AO / PI, Una prucedura di l'applicazione bicolore hè stata creata da u canali Verdi è u Canale Rossu à l'imaghjini AO è a fluorescenza PI, più un campu luminoso.Esempi d'imaghjini sò stati mostrati in Figura 2.
Figura 2. L'imaghjini di prima di u trasportu è dopu u trasportu di AdMSCs.A. Prima di u trasportu;una maghjina rappresentativa hè mostrata.B. Dopu à u trasportu;una maghjina rappresentativa hè mostrata.
A viabilità di l'AdMSC hè stata cambiata drasticamente dopu u trasportu cumparatu cù prima di u trasportu.A viabilità prima di u trasportu era 92%, ma hè ridutta à 71% dopu u trasportu.U risultatu hè statu mostratu in a Figura 3.
Figura 3. I risultati di viabilità di AdMSCs (Prima di u trasportu è dopu u trasportu)
U diamitru è l'agregazione sò ancu determinati da Countstar Rigel.U diametru di l'AdMSCs hè statu cambiatu drasticamente dopu u trasportu cumparatu cù prima di u trasportu.U diametru prima di u trasportu era 19 µm, ma hà aumentatu à 21 µm dopu u trasportu.L'agregazione di prima di u trasportu era di 20%, ma hà aumentatu à 25% dopu u trasportu.Da l'imaghjini catturati da Countstar Rigel, u fenotipu di AdMSC hè statu cambiatu drasticamente dopu u trasportu.I risultati sò stati mostrati in a Figura 4.
Figura 4: U diamitru è i risultati di l'agregazione.A: L'imaghjini rapprisentanti di l'AdMSC, u fenotipu di l'AdMSC sò stati cambiati drasticamente dopu u trasportu.B: L'agregazione prima di u trasportu era 20%, ma hà aumentatu à 25% dopu u trasportu.C: U diametru prima di u trasportu era 19µm, ma hà aumentatu à 21µm dopu u trasportu.
Determina l'immunofenotipu di AdMSC da Countstar Rigel
L'immunofenotipu di AdMSC sò stati determinati da Countstar Rigel, AdMSC sò stati incubati cù anticorpi differenti rispettivamente (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Una prucedura di applicazione di u culore di u segnu hè stata creata mettendu un canale Verde à l'imaghjini di fluoriscenza PE, più un campu luminoso.A segmentazione di riferimentu di l'immagine di u campu luminosu hè stata applicata cum'è una maschera per campionà u signale di fluorescenza PE.I risultati di CD105 sò stati mostrati (Figura 5).
Figura 5: I risultati CD105 di AdMSC sò stati determinati da Countstar Rigel.A: Analisi quantitativa di u percentuale pusitivu di CD105 in diversi campioni da u software FCS express 5 plus.B: L'imaghjini d'alta qualità furnisce infurmazioni morfologiche supplementari.C: Risultati validati da miniature di ogni cellula, i strumenti di u software FCS divisu e cellule in diversi gruppi secondu a so espressione di proteina variata.
Altri risultati di l'anticorpi sò stati mostrati in Fig 6
Figura 6: A: Una maghjina rappresentativa di ASC cù morfologia tipica in forma di fusu.Captu da u microscope OLYMPUS.Ingrandimentu originale, (10x).B: A differenziazione adipogenica di l'ASC hè pruvata da a tintura di Ruthenium Red chì mostra zoni di mineralizazione.Captu da u microscope OLYMPUS.Ingrandimentu originale (10x).C: Caratterizzazione Countstar FL di ASC.
Riassuntu:
U Countstar FL pò monitorà a cuncentrazione, a viabilità è e caratteristiche di u fenotipu (è i so cambiamenti) durante a produzzione è a differenziazione di sti cellule staminali.FCS express furnisce a funzione di rivisione ogni cellula di signale, cunvalidà e dati attraversu l'imaghjini.L'utilizatore pò ancu avè a cunfidenza di realizà i prossimi esperimenti basatu nantu à i risultati di Countstar Rigel.U Countstar Rigel offre un metudu rapidu, sofisticatu è affidabile per u cuntrollu di qualità di e cellule staminali.
