AOPI Dual-fluoresces counting je typ testu používaný pro detekci buněčné koncentrace a životaschopnosti.Roztok je kombinací akridinové oranže (zeleně fluorescenční barvivo nukleové kyseliny) a propidiumjodidu (červeně fluorescenční barvivo nukleové kyseliny).Propidium jodid (PI) je membránové vylučovací barvivo, které proniká pouze do buněk s narušenými membránami, zatímco akridinová oranž je schopna proniknout do všech buněk v populaci.Pokud jsou v jádře přítomna obě barviva, propidium jodid způsobí snížení fluorescence akridinové oranže přenosem fluorescenční rezonanční energie (FRET).V důsledku toho se buňky s jádry s neporušenými membránami barví fluorescenčně zeleně a jsou počítány jako živé, zatímco buňky s jádry s narušenými membránami se barví pouze fluorescenčně červeně a jsou počítány jako mrtvé při použití systému Countstar® FL.Materiál bez jádra, jako jsou červené krvinky, krevní destičky a zbytky, nefluoreskují a software Countstar® FL je ignoruje.
Proces terapie kmenovými buňkami
Obrázek 4 Monitorování životaschopnosti a počtu buněk mezenchymálních kmenových buněk (MSC) pro použití v buněčných terapiích.
Stanovte životaschopnost MSC pomocí testu AO/PI a trypanové modři
Obrázek 2. A. Obraz MSC obarvených AO/PI a trypanovou modří;2. Porovnání výsledku AO/PI a trypanové modři před a po transportu.
Index lomu buněk se mění, barvení trypanovou modří nebylo tak zřejmé, je obtížné určit životaschopnost po transportu.Zatímco dvoubarevná fluorescence umožňuje barvení živých a mrtvých jaderných buněk, generuje přesné výsledky životaschopnosti i v přítomnosti trosek, krevních destiček a červených krvinek.
