Crynodeb: Mae bôn-gelloedd mesenchymal yn is-set o fôn-gelloedd lluosog y gellir eu hynysu o'r mesoderm.Gyda'u nodweddion adnewyddu hunan-ddyblygu a gwahaniaethu aml-gyfeiriad, mae ganddynt botensial uchel ar gyfer therapïau amrywiol mewn meddygaeth.Mae gan fôn-gelloedd mesenchymal ffenoteip imiwnedd unigryw a gallu i reoleiddio imiwnedd.Felly, mae bôn-gelloedd mesenchymal eisoes yn cael eu defnyddio'n helaeth mewn trawsblaniadau bôn-gelloedd, peirianneg meinwe, a thrawsblannu organau.A thu hwnt i'r cymwysiadau hyn, fe'u defnyddir fel arf delfrydol mewn peirianneg meinwe fel celloedd hadwr mewn cyfres o arbrofion ymchwil sylfaenol a chlinigol.Hyd yn hyn, nid oes dull a safon a dderbynnir yn eang ar gyfer rheoli ansawdd bôn-gelloedd mesenchymal.Gall y Countstar Rigel fonitro crynodiad, hyfywedd, a nodweddion ffenoteip (a'u newidiadau) wrth gynhyrchu a gwahaniaethu'r bôn-gelloedd hyn.Mae gan y Countstar Rigel hefyd y fantais o gael gwybodaeth forffolegol ychwanegol, a ddarperir gan y recordiadau delwedd parhaol sy'n seiliedig ar faes llachar a fflworoleuedd yn ystod y broses gyfan o fonitro ansawdd celloedd.Mae'r Countstar Rigel yn cynnig dull cyflym, soffistigedig a dibynadwy ar gyfer rheoli ansawdd bôn-gelloedd.
Deunyddiau a dulliau:
Rhoddwyd bôn-gelloedd mesenchymal sy'n deillio o adipose (AdMSCs) gan yr Athro Nianmin Qi, datrysiad staenio AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Gwrthgyrff: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
Cafodd AdMSCs eu meithrin mewn deorydd lleithiwyd 37 ℃, 5% CO2.Treuliwch gyda trypsin cyn ei ddefnyddio.
Dilynwyd gweithdrefn staenio marciwr CD fel llawlyfr gwrthgorff.
Canfod marciwr CD gyda Countstar Rigel:
1. Crëwyd gweithdrefn cais lliw signal trwy osod y sianel AG i ddelwedd fflworoleuedd PE.
2. Daliwyd 3 maes o bob siambr.
3. Ar ôl cwblhau delweddu a dadansoddiad cychwynnol, gosodwyd y gosodiad trothwy (giât log) ar gyfer trawsnewid cadarnhaol a negyddol gan feddalwedd FCS.
Rheoli ansawdd bôn-gelloedd
Mae'r Ffigur canlynol (Ffigur 1) yn dangos y weithdrefn o therapi bôn-gelloedd .
Ffigur 1: Y weithdrefn ar gyfer therapi bôn-gelloedd
Canlyniadau:
Pennu crynodiad, hyfywedd, diamedr, a chyfuniad AdMSCs.
Pennwyd hyfywedd AdMSCs gan AO/PI, Crëwyd gweithdrefn gymhwyso lliw deuol trwy osod sianel Werdd a sianel Goch i ddelwedd fflworoleuedd AO a PI, ynghyd â maes llachar.Dangoswyd enghreifftiau o ddelweddau yn Ffigur 2.
Ffigur 2. Delweddau o AdMSCs cyn eu cludo ac ar ôl eu cludo.A. Cyn cludo;dangosir delwedd gynrychioliadol.B. Ar ôl cludo;dangosir delwedd gynrychioliadol.
Newidiwyd hyfywedd AdMSCs yn sylweddol ar ôl eu cludo o gymharu â chyn cludo.Roedd hyfywedd cyn cludo yn 92%, ond gostyngodd i 71% ar ôl cludo.Dangoswyd y canlyniad yn Ffigur 3.
Ffigur 3. Canlyniadau hyfywedd AdMSCs (Cyn cludo ac ar ôl eu cludo)
Pennwyd y diamedr a'r agregiad hefyd gan Countstar Rigel.Newidiwyd diamedr AdMSCs yn sylweddol ar ôl eu cludo o gymharu â chyn cludo.Y diamedr cyn cludo oedd 19µm, ond cynyddodd i 21µm ar ôl cludo.Roedd cyfanswm y cyn cludo yn 20%, ond cynyddodd i 25% ar ôl cludo.O'r delweddau a ddaliwyd gan Countstar Rigel, newidiwyd ffenoteip AdMSCs yn sylweddol ar ôl eu cludo.Dangoswyd y canlyniadau yn Ffigur 4.
Ffigur 4: Canlyniadau'r diamedr a'r agregiad.A: Newidiwyd y delweddau cynrychioliadol o AdMSCs, ffenoteip AdMSCs yn sylweddol ar ôl eu cludo.B: Y cyfanred cyn cludo oedd 20%, ond cynyddodd i 25% ar ôl cludo.C: Y diamedr cyn ei gludo oedd 19µm, ond cynyddodd i 21µm ar ôl ei gludo.
Darganfyddwch imiwnoffoteip AdMSCs gan Countstar Rigel
Pennwyd immunophenoteip AdMSCs gan Countstar Rigel, cafodd AdMSCs eu deor â gwrthgorff gwahanol yn y drefn honno (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Crëwyd gweithdrefn cais lliw signal trwy osod sianel Werdd i ddelwedd fflworoleuedd PE, ynghyd â maes llachar.Cymhwyswyd segmentiad cyfeirio darlun maes llachar fel mwgwd i samplu'r signal fflworoleuedd AG.Dangoswyd canlyniadau CD105 (Ffigur 5).
Ffigur 5: Pennwyd canlyniadau CD105 AdMSC gan Countstar Rigel.A: Dadansoddiad meintiol o'r ganran gadarnhaol o CD105 mewn gwahanol samplau gan feddalwedd FCS express 5 plus.B: Mae delweddau o ansawdd uchel yn darparu gwybodaeth forffolegol ychwanegol.C: Canlyniadau wedi'u dilysu yn ôl mân-luniau o bob cell unigol, rhannodd offer meddalwedd FCS y celloedd yn grwpiau gwahanol yn ôl eu mynegiant protein amrywiol.
Dangoswyd canlyniadau gwrthgyrff eraill yn Ffig 6
Ffigur 6: A: Delwedd gynrychioliadol o ASCs gyda morffoleg siâp gwerthyd nodweddiadol.Wedi'i ddal gan ficrosgop OLYMPUS.Chwyddiad gwreiddiol, (10x).B: Mae staenio coch Ruthenium yn dangos ardaloedd o fwyneiddiad yn dystiolaeth o wahaniaethiad adipogenig o ASCs.Wedi'i ddal gan ficrosgop OLYMPUS.Chwyddiad gwreiddiol (10x).C: Nodweddion Countstar FL o ASCs.
Crynodeb:
Gall y Countstar FL fonitro crynodiad, hyfywedd, a nodweddion ffenoteip (a'u newidiadau) wrth gynhyrchu a gwahaniaethu'r bôn-gelloedd hyn.Mae FCS express yn cyflenwi'r swyddogaeth i adolygu pob cell signal, dilysu'r data trwy'r ddelwedd.Gall y defnyddiwr hefyd gael yr hyder i gynnal yr arbrofion nesaf yn seiliedig ar ganlyniadau Countstar Rigel.Mae'r Countstar Rigel yn cynnig dull cyflym, soffistigedig a dibynadwy ar gyfer rheoli ansawdd bôn-gelloedd.
