Mae dadansoddi'r leukocytes mewn gwaed cyfan yn assay arferol mewn labordy clinigol neu fanc gwaed.Crynodiad a hyfywedd y leukocytes yw'r mynegai hanfodol ar gyfer rheoli ansawdd storio gwaed.Ar wahân i leukocyte, mae gwaed cyfan yn cynnwys nifer fawr o blatennau, celloedd gwaed coch, neu falurion cellog, sy'n ei gwneud hi'n amhosibl dadansoddi gwaed cyfan yn uniongyrchol o dan y microsgop neu'r cownter celloedd maes llachar.Mae dulliau confensiynol o gyfrif celloedd gwaed gwyn yn cynnwys proses lysis RBC, sy'n cymryd llawer o amser.
Cyfrif fflworoleuadau deuol AOPI yw'r math o assay a ddefnyddir i ganfod crynodiad celloedd a hyfywedd.Yr ateb yw cyfuniad o acridine oren (y staen asid niwclëig gwyrdd-fflworoleuol) a propidium ïodid (y staen asid niwclëig coch-fflworoleuol).Lliw allgáu pilen yw propidium ïodid (PI) sydd ond yn mynd i mewn i gelloedd â philenni dan fygythiad, tra bod oren acridine yn gallu treiddio i bob cell mewn poblogaeth.Pan fydd y ddau liw yn bresennol yn y cnewyllyn, mae propidium ïodid yn achosi gostyngiad mewn fflworoleuedd oren acridine trwy drosglwyddiad egni cyseiniant fflworoleuedd (FRET).O ganlyniad, mae celloedd cnewyllol â philenni cyfan yn staenio'n wyrdd fflwroleuol ac yn cael eu cyfrif fel rhai byw, tra bod celloedd cnewyllol â philenni dan fygythiad yn staenio coch fflwroleuol yn unig ac yn cael eu cyfrif yn farw wrth ddefnyddio system Countstar® Rigel.
Mae Countstar Rigel yn ateb delfrydol ar gyfer llawer o brofion nodweddu poblogaeth celloedd cymhleth, sy'n galluogi dadansoddi celloedd gwyn-gwaed mewn gwaed cyfan yn gyflym.
Gweithdrefn Arbrofol:
1.Cymer 20 µl o sampl gwaed a gwanhau'r sampl mewn 180 µl o PBS.
2.Ychwanegu hydoddiant AO/PI 12µl i mewn i sampl 12µl, wedi'i gymysgu'n ysgafn â phibed;
3.Tynnwch gymysgedd 20µl i mewn i sleid siambr;
4.Caniatáu i'r celloedd setlo yn y siambr am tua 1 munud;
5.Trwch y sleid i mewn i offeryn Countstar FL;
6.Dewiswch y assay “Hyfywdra AO/PI”, yna Rhowch ID Sampl ar gyfer y sampl hwn.
Cymhareb gwanhau 7.Select, Math Cell, cliciwch 'Rhedeg' i gychwyn y prawf.
Rhybudd: Mae AO a PI yn garsinogen posibl.Argymhellir bod y gweithredwr yn gwisgo offer amddiffynnol personol (PPE) i osgoi cysylltiad uniongyrchol â chroen a llygaid.
Canlyniad:
1. Delwedd Maes Disglair o waed cyfan
Yn y llun maes llachar o'r gwaed cyfan, nid yw CLlC i'w gweld ymhlith celloedd coch y gwaed.(Ffigur 1)
Ffigur 1 Delwedd maes llachar o waed cyfan.
2. Fflworoleuedd Delwedd o waed cyfan
Mae'r llifyn AO a PI yn staeniau DNA yng nghnewyllyn celloedd celloedd.Felly, nid yw platennau, celloedd gwaed coch, na malurion cellog yn gallu effeithio ar ganlyniad crynodiad a hyfywedd leukocytes.Mae leukocytes byw (Gwyrdd) a leukocytes marw (Coch) yn hawdd eu delweddu yn y delweddau fflworoleuedd.(Ffigur 2)
Ffigur 2 Fflworoleuedd Delweddau o waed cyfan.(A).Delwedd o Sianel AO;(B) Delwedd o DP Channel;(C) Cyfuno delweddau o AO a DP Channel.
3. Crynodiad a hyfywedd leukocytes
Mae meddalwedd Countstar FL yn cyfrif celloedd tair adran siambr yn awtomatig ac yn cyfrifo gwerth cyfartalog cyfanswm cyfrif celloedd CLlC (1202), crynodiad (1.83 x 106 cell/ml), a % hyfywedd (82.04%).Gellir allforio'r delweddau a'r data gwaed cyfan yn hawdd fel PDF, Delwedd neu Excel ar gyfer dadansoddiad ychwanegol neu archifo data.
Ffigur 3 Ciplun o Feddalwedd Countstar Rigel
