Dual-fluorescence Viability (AO/PI), Acridine orange (AO) og propidiumiodid (PI) er nuklear nukleinfarvning og syrebindende farvestoffer.AO kan trænge ind i membranen af ​​både døde og levende celler og farve kernen, hvilket genererer en grøn fluorescens.I modsætning hertil kan PI kun gennemtrænge de disintegrerende membraner af døde kerneholdige celler, hvilket genererer rød fluorescens.Den billedbaserede teknologi fra Countstar Rigel udelukker cellefragmenter, snavs og artefaktpartikler samt underdimensionerede hændelser såsom blodplader, hvilket giver et meget nøjagtigt resultat.Som konklusion kan Countstar Rigel-systemet bruges til hvert trin i cellefremstillingsprocessen.

T/NK-cellemedieret cytotoksicitet, I den nyligt godkendte CAR-T-celleterapi af FDA, binder gensplejsede T-lymfocytter sig specifikt til de målrettede cancerceller (T) og dræber dem.Countstar Rigel-analysatorerne er i stand til at analysere denne komplette proces med T/NK-cellemedieret cytotoksicitet.

Cytotoksicitetsundersøgelser udføres ved at mærke målkræftcellerne med CFSE eller transficere dem med GFP.Hoechst 33342 kan bruges til at farve alle celler (både T-celler og tumorceller).Alternativt kan måltumorceller farves med CFSE.Propidiumiodid (PI) bruges til at farve døde celler (både T-celler og tumorceller).Diskrimination mellem forskellige celler kan opnås ved hjælp af denne farvningsstrategi.

GFP-transfektionseffektivitet, i molekylær genetik, forskellige modelorganismer og cellebiologi bruges GFP-genet ofte som reporter til ekspressionsundersøgelser.I øjeblikket bruger forskere almindeligvis fluorescerende mikroskoper eller flowcytometre til at analysere transfektionseffektiviteten af ​​pattedyrceller.Men at håndtere den komplekse teknologi i et avanceret flowcytometer kræver en erfaren og højt kvalificeret operatør.Countstar Rigel gør det muligt for brugere nemt og præcist at udføre en transfektionseffektivitetsanalyse uden drifts- og vedligeholdelsesomkostninger forbundet med traditionel flowcytometri.

Celleapoptose, fremskridtene af celleapoptose kan overvåges ved hjælp af FITC-konjugeret Annexin-V i kombination med 7-ADD.Phosphatidylserin (PS) rester er normalt placeret på indersiden af ​​plasmamembranen af ​​raske celler.Under tidlig apoptose går membranintegriteten tabt, og PS vil blive translokeret til ydersiden af ​​cellemembranen.Annexin V har en stærk affinitet til PS og er derfor den ideelle markør for tidlige apoptotiske celler.

Cellecyklus, under celledeling indeholder celler øgede mængder af DNA.Mærket af PI er en stigning i fluorescensintensitet direkte proportional med en ophobning af DNA.Forskellene i de enkelte cellers fluorescensintensitet er indikatorerne for den faktiske status for cellecyklussen. MCF 7-celler blev behandlet med 4μM Nocodazol for at standse disse celler på forskellige stadier af deres cellecyklus.De lysfeltbilleder, der er opnået under dette testscenarie, giver os mulighed for at identificere hver enkelt celle.PI-fluorescenskanalen i Countstar Rigel identificerer DNA-signalerne fra enkeltceller selv i aggregater.En detaljeret analyse af fluorescensintensiteterne kan udføres ved hjælp af FCS.

CD Marker Fænotyping, Countstar Rigel-modellerne tilbyder en hurtigere, enklere og mere følsom tilgang til, mere effektiv immunbaseret fænotyping af celler.Med billeder i høj opløsning og kraftfulde integrerede dataanalysemuligheder giver Countstar Rigel brugere mulighed for at opnå konsekvent pålidelige resultater uden behov for omfattende komplekse kontrolindstillinger og justeringer af fluorescenskompensation.

Cytokine Induced Killer (CIK) celledifferentiering demonstrerer den enestående ydeevnekvalitet af Countstar Rigel analysatoren i direkte sammenligning med højklasse flowcytometre.PBMC'er fra mus i kultur blev farvet med CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE og CD56-PE og induceret af Interleukin (IL) 6. Derefter analyseret samtidigt med Countstar® Rigel og Flowcytometri.I denne test blev CD3-CD4, CD3-CD8 og CD3-CD56 opdelt i tre grupper for at bestemme andelen af ​​forskellige cellesubpopulationer.

Påvisning af degenererede celler ved immunfluorescens, monoklonale antistoffer, der producerer cellelinjer, vil miste nogle positive kloner under celleproliferation og passage på grund af nedbrydning eller genetiske mutationer.Et større tab vil i væsentlig grad påvirke produktiviteten af ​​fremstillingsprocessen.Overvågningen af ​​nedbrydningen spiller en vigtig rolle i processtyringen for at flytte udbyttet af antistoffer til det optimale.

De fleste af antistofferne fremstillet i BioPharma-industrien kan påvises ved immunfluorescensmærkning og analyseres kvantitativt af Countstar Rigel-serien.Lysfelt- og fluorescenskanalbillederne nedenfor viser tydeligt de kloner, der mistede deres egenskab til at producere de ønskede antistoffer.Den mere detaljerede analyse med DeNovo FCS Express Image-softwaren bekræfter, at 86,35 % af alle celler udtrykker immunglobulinerne, kun 3,34 % er klart negative.

Trypan (bogstaver B i blåt) Celletælling, trypanblå farvning bruges stadig i de fleste cellekulturlaboratorier.

Trypan Blue Viability and Cell Density BioApp kan installeres på alle Countstar Rigel-modeller.Vores beskyttede billedgenkendelsesalgoritmer analyserer mere end 20 parametre for at klassificere hvert enkelt registreret objekt.

Cell Line Storage QC, I cellelagring sikrer et sofistikeret kvalitetsstyringskoncept sikker, effektiv overvågning af alle cellulære produkter.Dette garanterer den stabile kvalitet af celle kryokonserveret, kryokonserveret til eksperimenter, procesudvikling og produktion.

Countstar Rigel får billeder i høj opløsning og analyserer forskellige morfologiske egenskaber ved de cellulære objekter såsom diameter, form og aggregeringstendens.Billeder af forskellige procestrin kan nemt sammenlignes med hinanden.Så variationer i form og aggregering kan nemt opdages ved at undgå subjektive menneskelige målinger.Og Countstar Rigel-databasen har et sofistikeret styringssystem til lagring og hentning af billeder og data.