Das Countstar-System kombiniert das Bildzytometer und den Zellzähler in einem einzigen Tischgerät.Dieses anwendungsgesteuerte, kompakte und automatisierte Zell-Imaging-System bietet eine All-in-One-Lösung für die Krebszellforschung, einschließlich Zellzählung, Lebensfähigkeit (AO/PI, Trypanblau), Apoptose (Annexin V-FITC/PI), Zelle Zyklus (PI) und GFP/RFP-Transfektion.
Abstrakt
Krebs ist weltweit eine der Haupttodesursachen, und die Entwicklung neuer Krebsbehandlungsmethoden ist von großer Bedeutung.Krebszelle ist das grundlegende Forschungsobjekt von Krebs, verschiedene Informationen müssen von der Krebszelle ausgewertet werden.Dieses Forschungsgebiet benötigt eine schnelle, zuverlässige, einfache und detaillierte Zellanalyse.Das Countstar-System bietet eine einfache Lösungsplattform für die Analyse von Krebszellen.
Studiere Apoptose von Krebszellen von Countstar Rigel
Apoptose-Assays werden routinemäßig in vielen Laboratorien für verschiedene Zwecke verwendet, von der Beurteilung der Gesundheit von Zellkulturen bis zur Bewertung der Toxizität einer Reihe von Verbindungen.
Der Apoptose-Assay ist ein Typ, der zur Bestimmung des Apoptoseprozentsatzes von Zellen durch das Annexin V-FITC/PI-Färbeverfahren verwendet wird.Annexin V bindet an Phosphatidylserin (PS) mit früher Apoptosezelle oder Nekrosezelle.PI dringt nur in nekrotische/apoptotische Zellen im sehr späten Stadium ein.(Abbildung 1)
A: Frühe Apoptose Annexin V (+), PI (-)
B: Späte Apoptose Annexin V (+), PI (+)
Abbildung 1: Vergrößerte Details von Countstar Rigel-Bildern (5-fache Vergrößerung) von 293-Zellen, behandelt mit Annexin V FITC und PI
Zellzyklusanalyse von Krebszellen
Der Zellzyklus oder Zellteilungszyklus ist die Reihe von Ereignissen, die in einer Zelle stattfinden und zu ihrer Teilung und Vervielfältigung ihrer DNA (DNA-Replikation) führen, um zwei Tochterzellen zu produzieren.In Zellen mit Zellkern, wie in Eukaryoten, wird der Zellzyklus ebenfalls in drei Perioden unterteilt: Interphase, die mitotische (M) Phase und Zytokinese.Propidiumiodid (PI) ist ein Kernfarbstoff, der häufig zur Messung des Zellzyklus verwendet wird.Da der Farbstoff nicht in lebende Zellen eindringen kann, werden die Zellen vor dem Färben mit Ethanol fixiert.Alle Zellen werden dann gefärbt.Zellen, die sich auf die Teilung vorbereiten, enthalten zunehmende Mengen an DNA und zeigen eine proportional erhöhte Fluoreszenz.Unterschiede in der Fluoreszenzintensität werden verwendet, um den Prozentsatz von Zellen in jeder Phase des Zellzyklus zu bestimmen.Countstar kann das Bild erfassen und die Ergebnisse werden in der FCS Express-Software angezeigt.(Figur 2)
Abbildung 2: MCF-7 (A) und 293T (B) wurden mit dem Zellzyklus-Erkennungskit mit PI gefärbt, die Ergebnisse wurden von Countstar Rigel bestimmt und von FCS Express analysiert.
Bestimmung der Lebensfähigkeit und GFP-Transfektion in der Zelle
Während des Bioprozesses wird GFP häufig verwendet, um mit rekombinantem Protein als Indikator zu fusionieren.Bestimmen Sie die GFP-Fluoreszenz, die die Zielproteinexpression widerspiegeln kann.Countstar Rigel bietet einen schnellen und einfachen Assay zum Testen der GFP-Transfektion sowie der Lebensfähigkeit.Die Zellen wurden mit Propidiumiodid (PI) und Hoechst 33342 gefärbt, um die Population toter Zellen und die Gesamtzellpopulation zu definieren.Countstar Rigel bietet eine schnelle, quantitative Methode zur gleichzeitigen Bewertung der Effizienz und Lebensfähigkeit der GFP-Expression.(Figur 4)
Abbildung 4: Die Zellen werden mit Hoechst 33342 (blau) lokalisiert und der Prozentsatz der GFP-exprimierenden Zellen (grün) kann leicht bestimmt werden.Nicht lebensfähige Zellen werden mit Propidiumiodid (PI; rot) gefärbt.
Lebensfähigkeit und Zellzahl
AO/PI Dual-Fluoreszenz-Zählung ist der Assay-Typ, der zum Nachweis der Zellkonzentration und Lebensfähigkeit verwendet wird.Es unterteilt sich in die Zählung von Zelllinien und die Zählung von Primärzellen nach unterschiedlichen Zelltypen.Die Lösung enthält eine Kombination aus dem grün fluoreszierenden Nukleinsäurefarbstoff Acridinorange und dem rot fluoreszierenden Nukleinsäurefarbstoff Propidiumiodid.Propidiumiodid ist ein Membranausschlussfarbstoff, der nur in Zellen mit beschädigten Membranen eindringt, während Acridinorange in alle Zellen einer Population eindringt.Wenn beide Farbstoffe im Zellkern vorhanden sind, bewirkt Propidiumiodid eine Verringerung der Acridinorange-Fluoreszenz durch Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer (FRET).Infolgedessen färben sich kernhaltige Zellen mit intakten Membranen fluoreszierend grün und werden als lebend gezählt, während kernhaltige Zellen mit beeinträchtigten Membranen nur fluoreszierend rot gefärbt und bei Verwendung des Countstar Rigel-Systems als tot gezählt werden.Nicht kernhaltiges Material wie rote Blutkörperchen, Blutplättchen und Ablagerungen fluoreszieren nicht und werden von der Countstar Rigel-Software ignoriert.(Abbildung 5)
Abbildung 5: Countstar hat eine Dual-Fluoreszenz-Färbemethode für die einfache und genaue Bestimmung der PBMC-Konzentration und -Lebensfähigkeit optimiert.Mit AO/PI gefärbte Proben können mit dem Countar Rigel analysiert werden
