Dual-Fluoreszenz-Viabilität (AO/PI), Acridinorange (AO) und Propidiumiodid (PI) sind nukleare Nukleinsäure-Färbe- und säurebindende Farbstoffe.AO kann die Membran sowohl toter als auch lebender Zellen durchdringen und färbt den Zellkern, wodurch eine grüne Fluoreszenz erzeugt wird.Im Gegensatz dazu kann PI nur die sich auflösenden Membranen toter kernhaltiger Zellen durchdringen und dabei eine rote Fluoreszenz erzeugen.Die bildbasierte Technologie des Countstar Rigel schließt Zellfragmente, Trümmer und Artefaktpartikel sowie untergroße Ereignisse wie Blutplättchen aus und liefert ein hochpräzises Ergebnis.Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das Countstar Rigel-System für jeden Schritt des Zellherstellungsprozesses verwendet werden kann.

T/NK-Zell-vermittelte Zytotoxizität. Bei der kürzlich von der FDA zugelassenen CAR-T-Zelltherapie binden gentechnisch veränderte T-Lymphozyten spezifisch an die Zielkrebszellen (T) und töten sie ab.Die Analysegeräte von Countstar Rigel sind in der Lage, diesen vollständigen Prozess der durch T/NK-Zellen vermittelten Zytotoxizität zu analysieren.

Zytotoxizitätsstudien werden durchgeführt, indem die Zielkrebszellen mit CFSE markiert oder mit GFP transfiziert werden.Hoechst 33342 kann verwendet werden, um alle Zellen (sowohl T-Zellen als auch Tumorzellen) zu färben.Alternativ können Zieltumorzellen mit CFSE gefärbt werden.Propidiumiodid (PI) wird verwendet, um tote Zellen (sowohl T-Zellen als auch Tumorzellen) zu färben.Unter Verwendung dieser Färbestrategie kann eine Unterscheidung zwischen verschiedenen Zellen erhalten werden.

GFP-Transfektionseffizienz, In der Molekulargenetik, verschiedenen Modellorganismen und der Zellbiologie wird das GFP-Gen häufig als Reporter für Expressionsstudien verwendet.Gegenwärtig verwenden Wissenschaftler üblicherweise Fluoreszenzmikroskope oder Durchflusszytometer, um die Transfektionseffizienz von Säugetierzellen zu analysieren.Der Umgang mit der komplexen Technologie eines fortschrittlichen Durchflusszytometers erfordert jedoch einen erfahrenen und hochqualifizierten Bediener.Countstar Rigel ermöglicht Benutzern die einfache und genaue Durchführung eines Transfektionseffizienz-Assays ohne die Betriebs- und Wartungskosten, die mit der herkömmlichen Durchflusszytometrie verbunden sind.

Zellapoptose: Der Fortschritt der Zellapoptose kann unter Verwendung von FITC-konjugiertem Annexin-V in Kombination mit 7-ADD überwacht werden.Phosphatidylserin (PS)-Reste befinden sich normalerweise an der Innenseite der Plasmamembran gesunder Zellen.Während der frühen Apoptose geht die Membranintegrität verloren und PS wird zur Außenseite der Zellmembran verlagert.Annexin V hat eine starke Affinität zu PS und ist daher der ideale Marker für frühe apoptotische Zellen.

Zellzyklus, Während der Zellteilung enthalten Zellen erhöhte Mengen an DNA.Mit PI markiert, ist eine Zunahme der Fluoreszenzintensität direkt proportional zu einer Akkumulation von DNA.Die Unterschiede in den Fluoreszenzintensitäten der einzelnen Zellen sind die Indikatoren für den tatsächlichen Status des Zellzyklus. MCF 7-Zellen wurden mit 4 μM Nocodazol behandelt, um diese Zellen in verschiedenen Stadien ihres Zellzyklus anzuhalten.Die in diesem Testszenario aufgenommenen Hellfeldbilder ermöglichen es uns, jede einzelne Zelle zu identifizieren.Der PI-Fluoreszenzkanal des Countstar Rigel identifiziert die DNA-Signale einzelner Zellen auch in Aggregaten.Mit dem FCS kann eine detaillierte Analyse der Fluoreszenzintensitäten durchgeführt werden.

CD-Marker-Phänotypisierung, Die Countstar Rigel-Modelle bieten einen schnelleren, einfacheren und empfindlicheren Ansatz für eine effizientere immunbasierte Phänotypisierung von Zellen.Mit hochauflösenden Bildern und leistungsstarken integrierten Datenanalysefunktionen ermöglicht der Countstar Rigel Benutzern, konsistent zuverlässige Ergebnisse zu erzielen, ohne dass umfangreiche komplexe Steuerungseinstellungen und Anpassungen der Fluoreszenzkompensation erforderlich sind.

Die zytokininduzierte Killerzelldifferenzierung (CIK) demonstriert die herausragende Leistungsqualität des Countstar Rigel Analysegerätes im direkten Vergleich zu hochwertigen Durchflusszytometern.PBMCs von Mäusen in Kultur wurden mit CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE und CD56-PE gefärbt und durch Interleukin (IL) 6 induziert. Dann gleichzeitig mit Countstar® Rigel und Durchflusszytometrie analysiert.In diesem Test wurden die CD3-CD4, die CD3-CD8 und die CD3-CD56 in drei Gruppen eingeteilt, um den Anteil unterschiedlicher Zellsubpopulationen zu bestimmen.

Nachweis degenerierter Zellen durch Immunfluoreszenz, Monoklonale Antikörper produzierende Zelllinien verlieren einige positive Klone während der Zellproliferation und -passage aufgrund von Abbau oder genetischen Mutationen.Ein höherer Verlust wird die Produktivität des Herstellungsprozesses erheblich beeinträchtigen.Die Überwachung des Abbaus spielt eine wichtige Rolle bei der Prozessführung, um die Ausbeute an Antikörpern ins Optimum zu verschieben.

Die meisten der in der BioPharma-Industrie hergestellten Antikörper können durch Immunfluoreszenz-Markierung nachgewiesen und mit der Countstar Rigel-Serie quantitativ analysiert werden.Die Hellfeld- und Fluoreszenzkanalbilder unten zeigen deutlich jene Klone, die ihre Eigenschaft verloren haben, die gewünschten Antikörper zu produzieren.Die genauere Analyse mit der DeNovo FCS Express Image Software bestätigt, dass 86,35 % aller Zellen die Immunglobuline exprimieren, nur 3,34 % sind eindeutig negativ.

Trypan (B in Blau groß schreiben) Zellzählung, Trypanblau-Färbung wird immer noch in den meisten Zellkulturlabors verwendet.

Die Trypan Blue Viability and Cell Density BioApp kann auf allen Countstar Rigel-Modellen installiert werden.Unsere geschützten Bilderkennungsalgorithmen analysieren mehr als 20 Parameter, um jedes einzelne erkannte Objekt zu klassifizieren.

Cell Line Storage QC, In der Zelllagerung sorgt ein ausgeklügeltes Qualitätsmanagementkonzept für eine sichere und effiziente Überwachung aller Zellprodukte.Dies garantiert die stabile Qualität der kryokonservierten Zellen, kryokonserviert für Experimente, Prozessentwicklung und Produktion.

Der Countstar Rigel erfasst hochauflösende Bilder und analysiert verschiedene morphologische Merkmale der zellulären Objekte wie Durchmesser, Form und Aggregationstendenz.Bilder verschiedener Prozessschritte können einfach miteinander verglichen werden.So können Variationen in Form und Aggregation leicht erkannt werden, indem subjektive menschliche Messungen vermieden werden.Und die Countstar Rigel-Datenbank verfügt über ein ausgeklügeltes Verwaltungssystem zum Speichern und Abrufen von Bildern und Daten.