Biologika und AAV-basierte Gentherapien gewinnen immer mehr Marktanteile bei der Behandlung von Krankheiten.Die Entwicklung einer robusten und effizienten Säugetierzelllinie für ihre Produktion ist jedoch eine Herausforderung und erfordert normalerweise eine umfassende zelluläre Charakterisierung.Historisch gesehen wird bei diesen zellbasierten Assays ein Durchflusszytometer verwendet.Ein Durchflusszytometer ist jedoch relativ teuer und erfordert umfangreiches Training sowohl für den Betrieb als auch für die Wartung.In jüngster Zeit wurde die bildbasierte Zytometrie mit zunehmenden Rechenkapazitäten und hochwertigen Kamerasensoren innoviert, um eine präzise und kostengünstige Alternative für die Prozessentwicklung von Zelllinien bereitzustellen.In dieser Arbeit haben wir einen Arbeitsablauf zur Entwicklung von Zelllinien beschrieben, der ein bildbasiertes Zytometer, nämlich das Countstar Rigel, zur Bewertung der Transfektionseffizienz und zur Bewertung stabiler Pools unter Verwendung von CHO- und HEK293-Zellen, die Antikörper bzw. rAAV-Vektor exprimieren, enthält.In den beiden Fallstudien haben wir gezeigt:
- Countstar Rigel lieferte eine ähnliche Nachweisgenauigkeit wie die Durchflusszytometrie.
- Die auf Countstar Rigel basierende Poolbewertung kann dabei helfen, die wünschenswerte Gruppe für das Klonen von Einzelzellen (SCC) zu bestimmen.
- Die in Countstar Rigel integrierte Zelllinien-Entwicklungsplattform erreichte einen mAb-Titer von 2,5 g/l.
Wir haben auch die Möglichkeit diskutiert, Countstar als weitere Ebene eines rAAV-DoE-basierten Optimierungsziels zu verwenden.
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