Το σύστημα Countstar συνδυάζει το κυτταρόμετρο εικόνας και τον μετρητή κυψελών σε ένα ενιαίο όργανο πάγκου.Αυτό το σύστημα απεικόνισης κυττάρων που βασίζεται σε εφαρμογές, συμπαγές και αυτοματοποιημένο σύστημα απεικόνισης κυττάρων παρέχει μια λύση όλα-σε-ένα για την έρευνα καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της μέτρησης κυττάρων, της βιωσιμότητας (AO/PI, μπλε τρυπάνης), της απόπτωσης (Annexin V-FITC/PI), των κυττάρων κύκλου (PI) και διαμόλυνσης GFP/RFP.
Αφηρημένη
Ο καρκίνος είναι μια από τις κύριες αιτίες θανάτου παγκοσμίως και η ανάπτυξη νέων μεθόδων θεραπείας του καρκίνου είναι μεγάλης σημασίας.Το καρκινικό κύτταρο είναι το βασικό ερευνητικό αντικείμενο του καρκίνου, πρέπει να αξιολογηθούν διάφορες πληροφορίες από το καρκινικό κύτταρο.Αυτή η ερευνητική περιοχή χρειάζεται γρήγορη, αξιόπιστη, απλή και λεπτομερή ανάλυση κυττάρων.Το σύστημα Countstar παρέχει μια απλή πλατφόρμα λύσης για ανάλυση καρκινικών κυττάρων.
Μελέτη απόπτωσης καρκινικών κυττάρων από τον Countstar Rigel
Οι δοκιμασίες απόπτωσης χρησιμοποιούνται συνήθως σε πολλά εργαστήρια για διαφορετικούς σκοπούς, από την αξιολόγηση της υγείας των κυτταρικών καλλιεργειών έως την αξιολόγηση της τοξικότητας μιας ομάδας ενώσεων.
Η δοκιμασία απόπτωσης είναι ένας τύπος που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του ποσοστού απόπτωσης των κυττάρων με τη μέθοδο χρώσης Annexin V-FITC/PI.Η αννεξίνη V συνδέεται με τη φωσφατιδυλοσερίνη (PS) με κύτταρο πρώιμης απόπτωσης ή κύτταρο νέκρωσης.Το PI εισέρχεται μόνο σε νεκρωτικά/πολύ όψιμα αποπτωτικά κύτταρα.(Φιγούρα 1)
Α: Πρώιμη απόπτωση Αννεξίνη V (+), PI (-)
B: Όψιμη απόπτωση Αννεξίνη V (+), PI (+)
Σχήμα 1: Μεγεθυσμένες λεπτομέρειες εικόνων Countstar Rigel (5 x μεγέθυνση) 293 κυττάρων, επεξεργασμένες με Annexin V FITC και PI
Ανάλυση Κυτταρικού Κύκλου Καρκινικών Κυττάρων
Ο κυτταρικός κύκλος ή ο κύκλος κυτταρικής διαίρεσης είναι η σειρά γεγονότων που λαμβάνουν χώρα σε ένα κύτταρο που οδηγεί στη διαίρεση και τον διπλασιασμό του DNA του (αντιγραφή DNA) για να παραχθούν δύο θυγατρικά κύτταρα.Σε κύτταρα με πυρήνα, όπως και στους ευκαρυώτες, ο κυτταρικός κύκλος χωρίζεται επίσης σε τρεις περιόδους: μεσόφαση, μιτωτική (Μ) φάση και κυτταροκίνηση.Το ιωδιούχο προπίδιο (PI) είναι μια πυρηνική χρωστική που χρησιμοποιείται συχνά για τη μέτρηση του κυτταρικού κύκλου.Επειδή η χρωστική δεν μπορεί να εισέλθει σε ζωντανά κύτταρα, τα κύτταρα στερεώνονται με αιθανόλη πριν από τη χρώση.Στη συνέχεια, όλα τα κύτταρα βάφονται.Τα κύτταρα που προετοιμάζονται για διαίρεση θα περιέχουν αυξανόμενες ποσότητες DNA και θα εμφανίζουν αναλογικά αυξημένο φθορισμό.Οι διαφορές στην ένταση του φθορισμού χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό του ποσοστού των κυττάρων σε κάθε φάση του κυτταρικού κύκλου.Το Countstar μπορεί να καταγράψει την εικόνα και τα αποτελέσματα θα εμφανιστούν στο λογισμικό FCS express.(Σχήμα 2)
Εικόνα 2: MCF-7 (Α) και 293Τ (Β) χρωματίστηκαν με κιτ ανίχνευσης κυτταρικού κύκλου με PI, τα αποτελέσματα προσδιορίστηκαν με Countstar Rigel και αναλύθηκαν με FCS express.
Βιωσιμότητα και Προσδιορισμός Μεταμόλυνσης GFP σε Κύτταρο
Κατά τη διάρκεια της βιοδιεργασίας, το GFP χρησιμοποιείται συχνά για σύντηξη με ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη ως δείκτη.Προσδιορίστε το φθορίζον GFP που αντανακλά την έκφραση πρωτεΐνης στόχου.Το Countstar Rigel προσφέρει μια γρήγορη και απλή ανάλυση για τον έλεγχο της επιμόλυνσης GFP καθώς και της βιωσιμότητας.Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) και Hoechst 33342 για να καθοριστεί ο πληθυσμός νεκρών κυττάρων και ο συνολικός πληθυσμός κυττάρων.Το Countstar Rigel προσφέρει μια γρήγορη, ποσοτική μέθοδο για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας και της βιωσιμότητας έκφρασης GFP ταυτόχρονα.(Εικόνα 4)
Εικόνα 4: Τα κύτταρα εντοπίζονται χρησιμοποιώντας Hoechst 33342 (μπλε) και το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν GFP (πράσινο) μπορεί εύκολα να προσδιοριστεί.Τα μη βιώσιμα κύτταρα χρωματίζονται με ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ, κόκκινο).
Βιωσιμότητα και αριθμός κυττάρων
Η μέτρηση διπλού φθορισμού AO/PI είναι ο τύπος ανάλυσης που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της συγκέντρωσης και της βιωσιμότητας των κυττάρων.Χωρίστηκε σε μέτρηση κυτταρικών σειρών και μέτρηση πρωτογενών κυττάρων σύμφωνα με διαφορετικό τύπο κυττάρων.Το διάλυμα περιέχει έναν συνδυασμό της χρώσης πράσινου-φθορισμού νουκλεϊκού οξέος, πορτοκαλί ακριδίνης, και του ερυθροφθορισμού νουκλεϊκού οξέος, ιωδιούχου προπιδίου.Το ιωδιούχο προπίδιο είναι μια βαφή αποκλεισμού της μεμβράνης που εισέρχεται μόνο σε κύτταρα με υποβαθμισμένες μεμβράνες, ενώ το πορτοκαλί ακριδίνης διεισδύει σε όλα τα κύτταρα ενός πληθυσμού.Όταν υπάρχουν και οι δύο χρωστικές στον πυρήνα, το ιωδιούχο προπίδιο προκαλεί μείωση του φθορισμού πορτοκαλί ακριδίνης μέσω μεταφοράς ενέργειας συντονισμού φθορισμού (FRET).Ως αποτέλεσμα, τα πυρηνωμένα κύτταρα με άθικτες μεμβράνες χρωματίζουν το φθορίζον πράσινο και υπολογίζονται ως ζωντανά, ενώ τα πυρηνωμένα κύτταρα με υποβαθμισμένες μεμβράνες χρωματίζουν μόνο το φθορίζον κόκκινο και υπολογίζονται ως νεκρά όταν χρησιμοποιείται το σύστημα Countstar Rigel.Μη πυρηνοποιημένο υλικό όπως ερυθρά αιμοσφαίρια, αιμοπετάλια και υπολείμματα δεν φθορίζουν και αγνοούνται από το λογισμικό Countstar Rigel.(Εικόνα 5)
Εικόνα 5: Η Countstar έχει βελτιστοποιήσει μια μέθοδο χρώσης διπλού φθορισμού για απλό, ακριβή προσδιορισμό της συγκέντρωσης και της βιωσιμότητας των PBMC.Τα δείγματα που έχουν χρωματιστεί με AO/PI μπορούν να αναλυθούν με το Counstar Rigel
