Ένα δείγμα που περιέχει κύτταρα σε εναιώρημα αναμειγνύεται με χρωστική μπλε Trypan και στη συνέχεια σύρεται στην αντικειμενοφόρο πλάκα θαλάμου Countstar που αναλύθηκε από τον αυτοματοποιημένο μετρητή κυψελών Countstar.Βασισμένα στην κλασική αρχή μέτρησης των κυανών κυττάρων του τρυπανίου, τα όργανα της Countstar ενσωματώνουν προηγμένη τεχνολογία οπτικής απεικόνισης, έξυπνη τεχνολογία αναγνώρισης εικόνας και ισχυρούς αλγόριθμους λογισμικού για όχι μόνο την παροχή της συγκέντρωσης και βιωσιμότητας των κυττάρων, αλλά και την παροχή πληροφοριών για τη συγκέντρωση των κυττάρων, τη βιωσιμότητα, τον ρυθμό συσσωμάτωσης, τη στρογγυλότητα , και κατανομή διαμέτρου με μία μόνο διαδρομή.
Συγκεντρωτική Ανάλυση Κυττάρων
Σχήμα 3 Καταμέτρηση συσσωρευμένων κυττάρων.
Α. Εικόνα δείγματος κυττάρων.
Β. Εικόνα δείγματος κυττάρων με αναγνωριστικό σήμα από το λογισμικό Countstar BioTech.(Πράσινος Κύκλος: Ζωντανό κελί, Κίτρινος Κύκλος: Νεκρό κελί, Κόκκινος Κύκλος: Συγκεντρωτικό Κύτταρο).
Γ. Συγκεντρωτικό Ιστόγραμμα
Ορισμένα πρωτεύοντα κύτταρα ή κύτταρα υποκαλλιέργειας είναι επιρρεπή να συσσωματωθούν όταν η κατάσταση της καλλιέργειας είναι κακή ή υπερβολική πέψη, προκαλώντας έτσι μεγάλη δυσκολία στην καταμέτρηση των κυττάρων.Με τη συνάρτηση βαθμονόμησης συνάθροισης, το Countstar μπορεί να πραγματοποιήσει έναν υπολογισμό διέγερσης συσσωματώσεων για να εξασφαλίσει ακριβή μέτρηση κυττάρων και να λάβει τον ρυθμό συσσωμάτωσης και το ιστόγραμμα συσσωμάτωσης, παρέχοντας έτσι τη βάση στους πειραματιστές να κρίνουν την κατάσταση των κυττάρων.
Παρακολούθηση της κυτταρικής ανάπτυξης
Εικόνα 4 Καμπύλη ανάπτυξης κυττάρων.
Η καμπύλη κυτταρικής ανάπτυξης είναι μια κοινή μέθοδος για τη μέτρηση της απόλυτης αύξησης του αριθμού των κυττάρων, ένας σημαντικός δείκτης για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης των κυττάρων και μια από τις βασικές παραμέτρους για την καλλιέργεια των βασικών βιολογικών ιδιοτήτων των κυττάρων.Προκειμένου να περιγραφεί με ακρίβεια η δυναμική αλλαγή στον αριθμό των κυττάρων σε όλη τη διαδικασία, η τυπική καμπύλη ανάπτυξης μπορεί να χωριστεί σε 4 μέρη: περίοδος επώασης με αργή ανάπτυξη.φάση εκθετικής ανάπτυξης με μεγάλη κλίση, φάση οροπεδίου και περίοδο πτώσης.Η καμπύλη κυτταρικής ανάπτυξης μπορεί να ληφθεί με γραφική παράσταση του αριθμού των ζωντανών κυττάρων (10'000/mL) έναντι του χρόνου καλλιέργειας (h ή d).
Μέτρηση της κυτταρικής συγκέντρωσης και βιωσιμότητας
Σχήμα 1 Οι εικόνες καταγράφηκαν από την Countstar BioTech καθώς τα κύτταρα (Vero, 3T3, 549, B16, CHO, Hela, SF9 και MDCK) σε εναιώρημα χρωματίστηκαν με Trypan Blue αντίστοιχα.
Το Countstar μπορεί να εφαρμοστεί σε κύτταρα με διάμετρο μεταξύ 5-180um, όπως κύτταρο θηλαστικού, κύτταρο εντόμων και ορισμένους πλαγκτόν.
Μέτρηση μεγέθους κυψέλης
Σχήμα 2 Μέτρηση μεγέθους κυττάρων CHO κυττάρων πριν και μετά τη διαμόλυνση πλασμιδίου.
Α. Εικόνες εναιωρήματος κυττάρων CHO που χρωματίστηκαν με μπλε τρυπάνης πριν και μετά τη διαμόλυνση πλασμιδίου.
Β. Σύγκριση ιστογράμματος μεγέθους κυττάρων CHO πριν και μετά τη διαμόλυνση πλασμιδίου.
Η αλλαγή του μεγέθους των κυττάρων είναι ένα βασικό χαρακτηριστικό και μετριέται συνήθως στην κυτταρική έρευνα.Κανονικά θα μετρηθεί σε αυτά τα πειράματα: κυτταρική επιμόλυνση, δοκιμασία φαρμάκου και δοκιμές κυτταρικής ενεργοποίησης.Το Countstar παρέχει στατιστικά μορφολογικά δεδομένα, όπως τα μεγέθη των κυττάρων, εντός 20 δευτερολέπτων.
Ο αυτοματοποιημένος μετρητής κελιών Countstar μπορεί να δώσει τα μορφολογικά δεδομένα των κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των ιστογραμμάτων κυκλικότητας και διαμέτρου.
