Πειραματικό Πρωτόκολλο
Το % κυτταροτοξικότητας υπολογίζεται από την παρακάτω εξίσωση.
Κυτταροτοξικότητα % = (Ζωντανοί αριθμοί ελέγχου – Ζωντανοί αριθμοί των υπό θεραπεία) / Ζωντανοί αριθμοί ελέγχου × 100
Επισημάνοντας τα καρκινικά κύτταρα-στόχους με μη τοξική, μη ραδιενεργή καλσεΐνη AM ή διαμόλυνση με GFP, μπορούμε να παρακολουθήσουμε τη θανάτωση των καρκινικών κυττάρων από τα κύτταρα CAR-T.Ενώ τα ζωντανά καρκινικά κύτταρα-στόχοι θα επισημαίνονται με μια πράσινη καλσεΐνη AM ή GFP, τα νεκρά κύτταρα δεν μπορούν να διατηρήσουν την πράσινη χρωστική.Το Hoechst 33342 χρησιμοποιείται για τη χρώση όλων των κυττάρων (τόσο Τ κύτταρα όσο και κύτταρα όγκου), εναλλακτικά, τα καρκινικά κύτταρα στόχοι μπορούν να χρωματιστούν με δεσμευμένη στη μεμβράνη calcein AM, το PI χρησιμοποιείται για τη χρώση των νεκρών κυττάρων (τόσο Τ κύτταρα όσο και κύτταρα όγκου).Αυτή η στρατηγική χρώσης επιτρέπει τη διάκριση διαφορετικών κυττάρων.
E: T Κυτταροτοξικότητα εξαρτώμενη από την αναλογία του K562
Τα παραδείγματα φθορίζουσες εικόνες Hoechst 33342, CFSE, PI είναι τα κύτταρα-στόχοι K562 σε t = 3 ώρες
Οι προκύπτουσες φθορίζουσες εικόνες έδειξαν αύξηση στα κύτταρα-στόχους Hoechst+CFSE+PI+ καθώς η αναλογία Ε:Τ αυξήθηκε
