El sistema combina el citómetro de imagen y el contador de células en un único instrumento de sobremesa.Este sistema de imágenes de células automatizado, compacto y basado en aplicaciones proporciona una solución todo en uno para la investigación de células cancerosas, incluido el recuento de células, la viabilidad (AO/PI, azul de tripano), la apoptosis (Anexina V-FITC/PI), la ciclo (PI) y transfección GFP/RFP.
Resumen
El cáncer es una de las principales causas de muerte en todo el mundo, y el desarrollo de nuevos métodos de tratamiento del cáncer es de gran importancia.La célula cancerosa es el objeto básico de investigación del cáncer, es necesario evaluar diversa información de la célula cancerosa.Esta área de investigación necesita un análisis celular rápido, confiable, simple y detallado.El sistema proporciona una plataforma de solución simple para el análisis de células cancerosas.
Estudio de la apoptosis de células cancerosas por Countstar Rigel
Los ensayos de apoptosis se utilizan de forma rutinaria en muchos laboratorios para una variedad de propósitos, desde evaluar la salud de los cultivos celulares hasta evaluar la toxicidad de un panel de compuestos.
El ensayo de apoptosis es un tipo utilizado para determinar el porcentaje de apoptosis de las células mediante el método de tinción de anexina V-FITC/PI.La anexina V se une a la fosfatidilserina (PS) con células de apoptosis temprana o células de necrosis.PI solo ingresa a las células apoptóticas necróticas / en etapa muy tardía.(Figura 1)
A： Apoptosis temprana Anexina V (+), PI (-)
B：Anexina V (+), PI (+) de apoptosis tardía
Figura 1: detalles ampliados de imágenes de Countstar Rigel (5 aumentos) de 293 células, tratadas con anexina V FITC y PI
Análisis del ciclo celular de la célula cancerosa
El ciclo celular o ciclo de división celular es la serie de eventos que tienen lugar en una célula que lleva a su división y duplicación de su ADN (replicación de ADN) para producir dos células hijas.En las células con núcleo, como en las eucariotas, el ciclo celular también se divide en tres períodos: la interfase, la fase mitótica (M) y la citocinesis.El yoduro de propidio (PI) es un colorante de tinción nuclear que se utiliza con frecuencia para medir el ciclo celular.Debido a que el tinte no puede entrar en las células vivas, las células se fijan con etanol antes de la tinción.A continuación, se tiñen todas las células.Las células que se preparan para la división contendrán cantidades crecientes de ADN y mostrarán una fluorescencia proporcionalmente mayor.Las diferencias en la intensidad de la fluorescencia se utilizan para determinar el porcentaje de células en cada fase del ciclo celular. puede capturar la imagen y los resultados se mostrarán en el software FCS express.(Figura 2)
Figura 2: MCF-7 (A) y 293T (B) se tiñeron con el kit de detección del ciclo celular con PI, los resultados se determinaron con Countstar Rigel y se analizaron con FCS express.
Viabilidad y determinación de transfección de GFP en células
Durante el bioproceso, la GFP se usa a menudo para fusionarse con proteína recombinante como indicador.Determinar el fluorescente GFP puede reflejar la expresión de la proteína objetivo. ofrece un ensayo rápido y simple para probar la transfección de GFP, así como la viabilidad.Las células se tiñeron con yoduro de propidio (PI) y Hoechst 33342 para definir la población de células muertas y la población total de células. ofrece un método rápido y cuantitativo para evaluar la eficacia y viabilidad de la expresión de GFP al mismo tiempo.(Figura 4)
Figura 4: Las células se ubican usando Hoechst 33342 (azul) y el porcentaje de células que expresan GFP (verde) se puede determinar fácilmente.Las células no viables se tiñen con yoduro de propidio (PI; rojo).
Viabilidad y recuento de células
El recuento de fluorescencia dual AO/PI es el tipo de ensayo utilizado para detectar la concentración celular y la viabilidad.Se dividió en conteo de líneas celulares y conteo de células primarias según el tipo de célula diferente.La solución contiene una combinación de la tinción de ácido nucleico verde fluorescente, naranja de acridina, y la tinción de ácido nucleico rojo fluorescente, yoduro de propidio.El yoduro de propidio es un tinte de exclusión de membrana que solo ingresa a las células con membranas comprometidas, mientras que el naranja de acridina penetra en todas las células de una población.Cuando ambos colorantes están presentes en el núcleo, el yoduro de propidio provoca una reducción de la fluorescencia naranja de acridina por transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET).Como resultado, las células nucleadas con membranas intactas se tiñen de verde fluorescente y se cuentan como vivas, mientras que las células nucleadas con membranas comprometidas solo se tiñen de rojo fluorescente y se cuentan como muertas cuando se usa el sistema .El material no nucleado, como los glóbulos rojos, las plaquetas y los desechos, no emite fluorescencia y el software los ignora.(Figura 5)
Figura 5: ha optimizado un método de tinción de fluorescencia dual para una determinación simple y precisa de la concentración y viabilidad de PBMC.Las muestras teñidas con AO/PI se pueden analizar con el Countstar Rigel
