Kahekordse fluorestsentsiga elujõulisus (AO/PI), akridiinoranž (AO) ja propiidiumjodiid (PI) on tuumanukleiine värvivad ja hapet siduvad värvained.AO võib tungida läbi nii surnud kui ka elavate rakkude membraani ja värvida tuuma, tekitades rohelise fluorestsentsi.Seevastu PI võib läbida ainult surnud tuumaga rakkude lagunevaid membraane, tekitades punase fluorestsentsi.Countstar Rigeli pildipõhine tehnoloogia välistab rakufragmendid, prahi ja artefaktiosakesed, samuti alamõõdulised sündmused, nagu trombotsüüdid, andes väga täpse tulemuse.Kokkuvõtteks võib öelda, et Countstar Rigel süsteemi saab kasutada raku tootmisprotsessi igal etapil.

T/NK-rakkude poolt vahendatud tsütotoksilisus. Hiljuti FDA poolt heaks kiidetud CAR-T-rakuteraapias seonduvad geneetiliselt muundatud T-lümfotsüüdid spetsiifiliselt sihtmärgiks olevate vähirakkudega (T) ja tapavad need.Countstar Rigel analüsaatorid suudavad analüüsida seda täielikku T/NK rakkude poolt vahendatud tsütotoksilisuse protsessi.

Tsütotoksilisuse uuringud viiakse läbi sihtmärkvähirakkude märgistamise teel CFSE-ga või nende transfekteerimisega GFP-ga.Hoechst 33342 võib kasutada kõigi rakkude (nii T-rakkude kui ka kasvajarakkude) värvimiseks.Alternatiivina võib sihtmärk-kasvajarakke värvida CFSE-ga.Propiidiumjodiidi (PI) kasutatakse surnud rakkude (nii T-rakkude kui ka kasvajarakkude) värvimiseks.Selle värvimisstrateegia abil saab eristada erinevaid rakke.

GFP transfektsiooni efektiivsus, molekulaargeneetikas, erinevates mudelorganismides ja rakubioloogias kasutatakse GFP geeni sageli ekspressiooniuuringute reporterina.Praegu kasutavad teadlased imetajate rakkude transfektsiooni efektiivsuse analüüsimiseks tavaliselt fluorestsentsmikroskoope või voolutsütomeetreid.Kuid täiustatud voolutsütomeetri keeruka tehnoloogia käsitsemine nõuab kogenud ja kõrgelt kvalifitseeritud operaatorit.Countstar Rigel võimaldab kasutajatel lihtsalt ja täpselt sooritada transfektsiooni efektiivsuse analüüsi ilma traditsioonilise voolutsütomeetriaga seotud tegevus- ja hoolduskuludeta.

Raku apoptoos, raku apoptoosi kulgu saab jälgida, kasutades FITC konjugeeritud anneksiin-V kombinatsioonis 7-ADD-ga.Fosfatidüülseriini (PS) jäägid asuvad tavaliselt tervete rakkude plasmamembraani siseküljel.Varase apoptoosi ajal kaob membraani terviklikkus ja PS kandub rakumembraani välisküljele.Anneksiin V-l on tugev afiinsus PS-i suhtes ja seetõttu on see ideaalne marker varajaste apoptootiliste rakkude jaoks.

Rakutsükkel, rakkude jagunemise ajal sisaldavad rakud suuremas koguses DNA-d.PI-ga märgistatud fluorestsentsi intensiivsuse suurenemine on otseselt proportsionaalne DNA akumuleerumisega.Üksikute rakkude fluorestsentsi intensiivsuse erinevused on rakutsükli tegeliku oleku indikaatorid. MCF 7 rakke töödeldi 4 μM Nocodazoliga, et peatada need rakud nende rakutsükli erinevates etappides.Selle katsestsenaariumi käigus saadud ereda väljaga pildid võimaldavad meil tuvastada iga üksiku raku.Countstar Rigeli PI fluorestsentskanal tuvastab üksikute rakkude DNA signaalid isegi agregaatidena.Fluorestsentsi intensiivsuse üksikasjalikku analüüsi saab läbi viia FCS-i abil.

CD-markeri fenotüüpimine, Countstar Rigeli mudelid pakuvad kiiremat, lihtsamat ja tundlikumat lähenemist rakkude immuunpõhisele fenotüübi määramisele tõhusamalt.Kõrge eraldusvõimega piltide ja võimsa integreeritud andmeanalüüsi võimalustega võimaldab Countstar Rigel kasutajatel saavutada püsivalt usaldusväärseid tulemusi, ilma et oleks vaja ulatuslikke keerukaid juhtseadistusi ja fluorestsentsi kompensatsiooni reguleerimist.

Cytokine Induced Killer (CIK) rakkude diferentseerimine näitab Countstar Rigel analüsaatori silmapaistvat jõudluskvaliteeti võrreldes kõrge klassi voolutsütomeetritega.Kultuuris olevad hiire PBMC-d värviti CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE ja CD56-PE-ga ning indutseeriti interleukiin (IL) 6-ga. Seejärel analüüsiti samaaegselt Countstar® Rigeli ja voolutsütomeetriaga.Selles testis jagati CD3-CD4, CD3-CD8 ja CD3-CD56 kolme rühma, et määrata erinevate raku alampopulatsioonide osakaal.

Degenereerunud rakkude tuvastamine immunofluorestsentsi abil, monoklonaalsed antikehad, mis toodavad rakuliine, kaotavad rakkude proliferatsiooni ja passaaži käigus lagunemise või geneetiliste mutatsioonide tõttu mõned positiivsed kloonid.Suurem kadu mõjutab oluliselt tootmisprotsessi tootlikkust.Lagunemise jälgimine mängib olulist rolli protsessi juhtimisel, et viia antikehade saagis optimaalseks.

Enamikku BioPharma tööstuses toodetud antikehi saab tuvastada immunofluorestsentsmärgistusega ja kvantitatiivselt analüüsida Countstar Rigeli seeriaga.Allolevad ereda välja ja fluorestsentskanali kujutised näitavad selgelt neid kloone, mis kaotasid soovitud antikehade tootmise atribuudi.Detailsem analüüs DeNovo FCS Express Image tarkvaraga kinnitab, et 86,35% kõigist rakkudest ekspresseerivad immunoglobuliine, ainult 3,34% on selgelt negatiivsed.

Trüpaan (sinisega suurtäht B) Rakkude loendamine, Trüpaansinist värvimist kasutatakse endiselt enamikus rakukultuuri laborites.

Trypan Blue Viability ja Cell Density BioAppi saab installida kõikidele Countstar Rigeli mudelitele.Meie kaitstud pildituvastusalgoritmid analüüsivad enam kui 20 parameetrit, et klassifitseerida iga tuvastatud objekt.

Cell Line Storage QC, raku salvestusruumis tagab keerukas kvaliteedijuhtimise kontseptsioon kõigi mobiilsete toodete ohutu ja tõhusa jälgimise.See tagab katsete, protsesside arendamise ja tootmise jaoks külmsäilitatud rakkude stabiilse kvaliteedi.

Countstar Rigel saab kõrge eraldusvõimega pilte, analüüsides rakuliste objektide erinevaid morfoloogilisi omadusi, nagu läbimõõt, kuju ja agregatsiooni tendents.Erinevate protsessietappide pilte saab omavahel lihtsalt võrrelda.Seega saab subjektiivseid inimmõõtmisi vältides hõlpsasti tuvastada kuju ja agregatsiooni erinevusi.Ja Countstar Rigeli andmebaasil on keerukas haldussüsteem piltide ja andmete salvestamiseks ja otsimiseks.