Leukotsüütide analüüs täisveres on rutiinne analüüs kliinilises laboris või verepangas.Leukotsüütide kontsentratsioon ja elujõulisus on vere säilitamise kvaliteedikontrolli oluline näitaja.Lisaks leukotsüütidele sisaldab täisveri suurel hulgal vereliistakuid, punaseid vereliblesid või rakujääke, mistõttu on võimatu analüüsida täisverd otse mikroskoobi või valgusvälja rakuloenduri all.Tavalised valgevereliblede loendamise meetodid hõlmavad punaste vereliblede lüüsi protsessi, mis on aeganõudev.
AOPI Dual-fluoresces counting on testitüüp, mida kasutatakse rakkude kontsentratsiooni ja elujõulisuse tuvastamiseks.Lahus on akridiinoranži (roheline fluorestseeruv nukleiinhappevärv) ja propiidiumjodiidi (punaselt fluorestseeruv nukleiinhappevärv) kombinatsioon.Propidiumjodiid (PI) on membraani välistav värv, mis siseneb ainult kahjustatud membraanidega rakkudesse, samas kui akridiinoranž suudab tungida kõigisse populatsiooni rakkudesse.Kui tuumas on mõlemad värvained, vähendab propiidiumjodiid akridiinoranži fluorestsentsi fluorestsentsresonantsenergia ülekande (FRET) abil.Selle tulemusena värvuvad tervete membraanidega tuumaga rakud fluorestseeruvalt roheliseks ja neid loetakse elavateks, samas kui kahjustatud membraanidega tuumarakud värvivad ainult fluorestseeruvat punast ja loetakse Countstar® Rigel süsteemi kasutamisel surnuks.
Countstar Rigel on ideaalne lahendus paljude keerukate rakupopulatsiooni iseloomustamise analüüside jaoks, mis võimaldab kiiresti analüüsida valgeid vereliblesid täisveres.
Eksperimentaalne protseduur:
1. Võtke 20 µl vereproovi ja lahjendage proov 180 µl PBS-s.
2. Lisage 12 µl proovile 12 µl AO/PI lahust, segades õrnalt pipetiga;
3. Tõmmake 20 µl segu kambri slaidile;
4. Laske rakkudel umbes 1 minut kambris settida;
5. Pututage slaid Countstar FL instrumenti;
6. Valige "AO/PI elujõulisuse" test ja seejärel sisestage selle proovi proovi ID.
7. Valige Lahjendussuhe, Lahje tüüp, klõpsake testi alustamiseks nuppu "Käivita".
Ettevaatust: AO ja PI on potentsiaalsed kantserogeenid.Kasutajal on soovitatav kanda isikukaitsevahendeid (PPE), et vältida otsest kokkupuudet naha ja silmadega.
Tulemus:
1. Hele väli Pilt täisverest
Täisvere eredas väljapildis pole valgeid vereliblesid punaste vereliblede hulgas näha.(Joonis 1)
Joonis 1 Täisvere ereda väljaga pilt.
2. Fluorestsentskujutis täisverest
AO- ja PI-värv värvivad mõlemad DNA-d rakkude raku tuumas.Seetõttu ei suuda trombotsüüdid, punased verelibled või rakujäänused mõjutada leukotsüütide kontsentratsiooni ja elujõulisuse tulemust.Elusad leukotsüüdid (rohelised) ja surnud leukotsüüdid (punased) on fluorestsentspiltidel hõlpsasti visualiseeritavad.(Joonis 2)
Joonis 2 Täisvere fluorestsentskujutised.(A).AO kanali pilt;(B) PI-kanali kujutis;(C) Ühendage AO ja PI kanali kujutised.
3. Leukotsüütide kontsentratsioon ja elujõulisus
Tarkvara Countstar FL loendab automaatselt kolme kambrisektsiooni rakud ja arvutab WBC rakkude üldarvu (1202), kontsentratsiooni (1,83 x 106 rakku/ml) ja elujõulisuse protsendi (82,04%) keskmise väärtuse.Täisverepilte ja andmeid saab lisaanalüüsi või andmete arhiveerimiseks hõlpsasti eksportida PDF-ina, pildina või Excelina.
Joonis 3 Countstar Rigeli tarkvara ekraanipilt
