Laburpena: Zelula ama mesenkimalak mesodermotik isolatu daitezkeen zelula ama pluripotenteen azpimultzo bat dira.Autoerreplika berritzeko eta norabide anitzeko bereizketa ezaugarriekin, medikuntzan hainbat terapiarako potentzial handia dute.Zelula ama mesenkimalek fenotipo immunologikoa eta erregulazio immunologikoa duten gaitasun berezia dute.Hori dela eta, zelula ama mesenkimalak oso erabiliak dira jada zelula amaren transplanteetan, ehunen ingeniaritzan eta organoen transplanteetan.Eta aplikazio horietatik haratago, ehunen ingeniaritzan tresna aproposa gisa erabiltzen dira zelula ereitzaile gisa oinarrizko ikerketa kliniko eta ikerketako esperimentu batzuetan.Orain arte, ez dago zelula ama mesenkimalen kalitatea kontrolatzeko metodo eta estandar oso onarturik.Countstar Rigel-ek kontzentrazioa, bideragarritasuna eta fenotipoaren ezaugarriak (eta haien aldaketak) kontrola ditzake zelula am horien ekoizpenean eta desberdintzean.Countstar Rigel-ek informazio morfologiko osagarria lortzeko abantaila du, eremu argi iraunkorrek eta fluoreszentzian oinarritutako irudien grabazioek ematen duten zelulen kalitatea kontrolatzeko prozesu osoan zehar.Countstar Rigel-ek zelula amaren kalitatea kontrolatzeko metodo azkarra, sofistikatua eta fidagarria eskaintzen du.
Materialak eta metodoak:
Adipotik eratorritako zelula ama mesenkimalak (AdMSC) Nianmin Qi irakasleak oparitu zituen, AO/PI tindaketa-soluzioa (Shanghai RuiYu, CF002).Antigorputzak: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCak 37 ℃ eta % 5 CO2 hezetutako inkubagailu batean hazi ziren.Liseri tripsinarekin erabili aurretik.
CD markatzaileen tindaketa prozedura jarraitu zen antigorputzaren eskuliburu gisa.
CD markatzaileen detekzioa Countstar Rigel-ekin:
1. Seinale-kolorearen aplikazio prozedura bat sortu zen, PE kanala PE fluoreszentzia irudiaren arabera ezarriz.
2. Ganbera bakoitzetik 3 soro atera ziren.
3. Irudiak eta hasierako analisiak amaitu ondoren, transfekzio positiboa eta negatiboaren atalasea (erregistro-atea) ezarpena FCS softwareak ezarri zuen.
Zelula amaren kalitate-kontrola
Hurrengo irudian (1. irudia) prozedura erakusten da zelula amaren terapia .
1. irudia: zelula amen terapiarako prozedura
Emaitzak:
AdMSCen kontzentrazioa, bideragarritasuna, diametroa eta agregazioa zehaztea.
AdMSCen bideragarritasuna AO/PIren bidez zehaztu zen, kolore bikoitzeko aplikazio prozedura bat sortu zen kanal berdea eta kanal gorria AO eta PI fluoreszentzia irudian ezarriz, eta eremu distiratsu bat gehituz.Adibide irudiak 2. irudian erakutsi dira.
2. Irudia. AdMSC-ak garraiatu aurretik eta garraiatu ondoren irudiak.A. Garraioaren aurretik;irudi adierazgarri bat erakusten da.B. Garraioaren ondoren;irudi adierazgarri bat erakusten da.
AdMSCen bideragarritasuna erabat aldatu zen garraioaren ondoren garraioaren aurretikoarekin alderatuta.Garraioaren aurreko bideragarritasuna %92koa zen, baina garraioaren ondoren %71era murriztu zen.Emaitza 3. irudian ageri da.
3. irudia. AdMSC-en bideragarritasun-emaitzak (garraio aurretik eta garraiatu ondoren)
Diametroa eta agregazioa ere Countstar Rigelek zehaztu zituen.AdMSCen diametroa zeharo aldatu zen garraiatu ondoren garraiatu aurrekoarekin alderatuta.Garraioaren aurreko diametroa 19 µm zen, baina garraiatu ondoren 21 µm-ra igo zen.Garraioaren aurreko agregazioa %20koa zen, baina garraioaren ondoren %25era igo zen.Countstar Rigel-ek ateratako irudietatik, AdMSC-en fenotipoa zeharo aldatu zen garraioaren ondoren.Emaitzak 4. irudian ikusi ziren.
4. Irudia: Diametroa eta agregazioaren emaitzak.E: AdMSCen irudi adierazgarriak, AdMSCen fenotipoa erabat aldatu ziren garraiatu ondoren.B: Garraioaren aurreko agregazioa %20koa zen, baina garraioaren ondoren %25era igo zen.C: Garraioaren aurreko diametroa 19 µm zen, baina garraiatu ondoren 21 µm-ra igo zen.
AdMSCen immunofenotipoa zehaztu Countstar Rigel-ek
AdMSCen immunofenotipoa Countstar Rigel-ek zehaztu zuen, AdMSCak antigorputz ezberdinekin inkubatu ziren hurrenez hurren (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Seinale-koloreak aplikatzeko prozedura bat sortu zen, PE fluoreszentziaren irudiaren kanal berdea ezarriz, gehi eremu distiratsua.Eremu distiratsua irudiaren erreferentzia-segmentazioa maskara gisa aplikatu zen PE fluoreszentzia seinalea lagintzeko.CD105-en emaitzak erakutsi ziren (5. irudia).
5. Irudia: AdMSCen CD105 emaitzak Countstar Rigelek zehaztu zituen.A: CD105-ren ehuneko positiboaren analisi kuantitatiboa lagin ezberdinetan FCS express 5 plus softwarearen bidez.B: Kalitate handiko irudiek informazio morfologiko osagarria eskaintzen dute.C: Emaitzak zelula bakoitzaren irudi txikien bidez balioztatuta, FCS software-tresnek zelulak talde ezberdinetan banatu zituzten proteina-adierazpen ezberdinen arabera.
6. irudian beste antigorputzen emaitzak ikusi ziren
6. Irudia: A: ASCen irudi adierazgarria, ardatz-formako morfologia tipikoa duten.OLYMPUS mikroskopioak harrapatuta.Jatorrizko handitzea, (10x).B: ASCen bereizketa adipogenikoa mineralizazio-eremuak erakusten dituen Rutenio Gorriaren tindaketak frogatzen du.OLYMPUS mikroskopioak harrapatuta.Jatorrizko handitzea (10x).C: Countstar FL ASCen karakterizazioa.
Laburpen:
Countstar FL-k kontzentrazioa, bideragarritasuna eta fenotipoaren ezaugarriak (eta haien aldaketak) kontrola ditzake zelula am horien ekoizpenean eta desberdintzean.FCS express-ek seinale-zelula guztiak berrikusteko funtzioa eskaintzen du, datuak irudiaren bidez balioztatzeko.Erabiltzaileak Countstar Rigelen emaitzetan oinarritutako hurrengo esperimentuak egiteko konfiantza ere izan dezake.Countstar Rigel-ek zelula amaren kalitatea kontrolatzeko metodo azkarra, sofistikatua eta fidagarria eskaintzen du.
