Odol osoko leukozitoak aztertzea ohiko azterketa bat da laborategi klinikoan edo odol bankuan.Leukozitoen kontzentrazioa eta bideragarritasuna ezinbesteko indizea dira odol-biltegiratzeko kalitate-kontrol gisa.Leukozitoez gain, odol osoak plaketa, globulu gorriak edo zelula-hondakin ugari ditu, eta horrek ezinezkoa egiten du odol osoa zuzenean mikroskopioan edo eremu distiratsuko zelulen kontagailuaren azpian aztertzea.Globulu zuriak zenbatzeko ohiko metodoek RBC lisi prozesua dakar, eta horrek denbora asko eskatzen du.
AOPI Fluoresze bikoitzeko zenbaketa zelulen kontzentrazioa eta bideragarritasuna detektatzeko erabiltzen den saiakuntza mota da.Soluzioa akridina laranja (azido nukleiko berde-fluoreszentea) eta propidio ioduroa (azido nukleiko gorri-fluoreszentea) konbinazioa da.Propidio ioduroa (PI) mintza baztertzeko koloratzaile bat da, mintz arriskutsuak dituzten zeluletan soilik sartzen dena, eta akridina laranja populazio bateko zelula guztietan sartzeko gai den bitartean.Bi koloratzaileak nukleoan daudenean, propidio ioduroak akridina laranja fluoreszentzia murriztea eragiten du fluoreszentzia erresonantzia energia transferentziaren bidez (FRET).Ondorioz, mintza osorik duten zelula nukleatuek berde fluoreszenteak zikindu eta bizi gisa kontatuko dira, mintz konprometituak dituzten zelula nukleatuek gorriz fluoreszentea baino ez dute zikindu eta Countstar® Rigel sistema erabiltzean hildako gisa zenbatzen dira.
Countstar Rigel zelula-populazioaren karakterizazio-saiakuntza konplexu askotarako irtenbide ezin hobea da, odol osoko globulu zuriak azkar aztertzeko aukera ematen duena.
Prozedura esperimentala:
1. Hartu 20 µl odol lagin eta diluitu lagina 180 µl PBStan.
2.Gehitu 12 µl AO/PI disoluzioa 12 µl lagin batean, astiro-astiro pipetarekin nahastuta;
3.Marraztu 20µl nahasketa ganberako diapositiba batean;
4.Utzi zelulak ganberan finkatzen minutu 1 inguruan;
5.Intsektatu diapositiba Countstar FL tresnan;
6.Aukeratu "AO/PI Bideragarritasuna" saiakuntza eta, ondoren, sartu lagin honen ID laginaren IDa.
7.Hautatu Diluzio proportzioa, Gelaxka mota, sakatu 'Exekutatu' proba hasteko.
Kontuz: AO eta PI potentzial kartzinogenoa da.Eragileak babes pertsonaleko ekipamendua (PPE) eramatea gomendatzen da, larruazala eta begiekin zuzenean ukitzea ekiditeko.
Emaitza:
1. Eremu distiratsua odol osoaren irudia
Odol osoaren eremu distiratsuan, WBC-ak ez dira ikusten globulu gorrien artean.(1. irudia)
1. irudia Odol osoaren eremu argiaren irudia.
2. Fluoreszentzia Odol osoaren irudia
AO eta PI koloratzaileak zelulen zelulen nukleoko DNA orbanak dira.Beraz, plaketak, globulu gorriak edo hondakin zelularrak ezin dira leukozitoen kontzentrazioan eta bideragarritasunaren emaitzan eragin.Leukozito biziak (berdea) eta leukozito hilak (gorria) erraz ikusten dira fluoreszentzia-irudietan.(2. irudia)
2. irudia Odol osoaren fluoreszentzia-irudiak.(A).AO kanalaren irudia;(B) PI kanalaren irudia;(C) Batu AO eta PI Channel-en irudiak.
3. Leukozitoen kontzentrazioa eta bideragarritasuna
Countstar FL softwareak automatikoki zenbatzen ditu hiru ganberako ataletako zelulak eta WBC zelulen zenbaketa osoaren (1202), kontzentrazioa (1,83 x 106 zelula/ml) eta % bideragarritasunaren (% 82,04) batez besteko balioa kalkulatzen du.Odol osoko irudiak eta datuak erraz esportatu daitezke PDF, Irudi edo Excel gisa analisi gehigarrietarako edo datuak artxibatzeko.
3. irudia Countstar Rigel softwarearen pantaila-argazkia
