سیستم Countstar سیتومتر تصویر و شمارنده سلولی را در یک ابزار روی نیمکت ترکیب می کند.این سیستم تصویربرداری سلولی مبتنی بر برنامه، فشرده و خودکار یک راه حل همه کاره برای تحقیقات سلول های سرطانی، از جمله شمارش سلولی، زنده ماندن (AO/PI، آبی تریپان)، آپوپتوز (Annexin V-FITC/PI)، سلول ارائه می کند. چرخه (PI)، و انتقال GFP/RFP.
خلاصه
سرطان یکی از علل اصلی مرگ و میر در سراسر جهان است و توسعه روش های جدید درمان سرطان از اهمیت زیادی برخوردار است.سلول سرطانی هدف اصلی تحقیق سرطان است، اطلاعات مختلفی باید از سلول سرطانی ارزیابی شود.این حوزه تحقیقاتی به تجزیه و تحلیل سلولی سریع، قابل اعتماد، ساده و دقیق نیاز دارد.سیستم Countstar یک پلت فرم راه حل ساده برای تجزیه و تحلیل سلول های سرطانی فراهم می کند.
مطالعه آپوپتوز سلول سرطانی توسط Countstar Rigel
سنجش آپوپتوز به طور معمول در بسیاری از آزمایشگاه‌ها برای اهداف مختلف از ارزیابی سلامت کشت‌های سلولی گرفته تا ارزیابی سمیت گروهی از ترکیبات استفاده می‌شود.
سنجش آپوپتوز نوعی است که برای تعیین درصد آپوپتوز سلول ها با روش رنگ آمیزی Annexin V-FITC/PI استفاده می شود.Annexin V با سلول آپوپتوز اولیه یا سلول نکروز به فسفاتیدیل سرین (PS) متصل می شود.PI فقط وارد سلول‌های نکروزه یا آپوپتوز بسیار دیررس می‌شود.(شکل 1)
A: آپوپتوز زودرس Annexin V (+)، PI (-)
B: آپوپتوز دیررس Annexin V (+)، PI (+)
شکل 1: جزئیات بزرگ شده تصاویر Countstar Rigel (با بزرگنمایی 5 x) از 293 سلول، تیمار شده با Annexin V FITC و PI
تجزیه و تحلیل چرخه سلولی سلول سرطانی
چرخه سلولی یا چرخه تقسیم سلولی مجموعه رویدادهایی است که در یک سلول رخ می دهد که منجر به تقسیم و تکثیر DNA آن (تکثیر DNA) برای تولید دو سلول دختر می شود.در سلول‌های دارای هسته، مانند یوکاریوت‌ها، چرخه سلولی نیز به سه دوره تقسیم می‌شود: اینترفاز، فاز میتوزی (M) و سیتوکینز.پروپیدیوم یدید (PI) یک رنگ رنگ آمیزی هسته ای است که اغلب برای اندازه گیری چرخه سلولی استفاده می شود.از آنجایی که رنگ نمی تواند وارد سلول های زنده شود، سلول ها قبل از رنگ آمیزی با اتانول تثبیت می شوند.سپس تمام سلول ها رنگ آمیزی می شوند.سلول‌هایی که برای تقسیم آماده می‌شوند حاوی مقادیر فزاینده‌ای DNA هستند و فلورسانس را به نسبت افزایش می‌دهند.تفاوت در شدت فلورسانس برای تعیین درصد سلول ها در هر مرحله از چرخه سلولی استفاده می شود.Countstar می تواند تصویر را بگیرد و نتایج در نرم افزار FCS express نمایش داده می شود.(شکل 2)
شکل 2: MCF-7 (A) و 293T (B) با کیت تشخیص چرخه سلولی با PI رنگ‌آمیزی شدند، نتایج توسط Countstar Rigel تعیین شد و توسط FCS Express آنالیز شد.
زنده ماندن و تعیین انتقال GFP در سلول
در طول فرآیند زیستی، GFP اغلب برای ترکیب با پروتئین نوترکیب به عنوان یک شاخص استفاده می شود.تعیین می تواند فلورسنت GFP بیان پروتئین هدف را منعکس کند.Countstar Rigel یک سنجش سریع و ساده برای آزمایش ترانسفکشن GFP و همچنین زنده بودن ارائه می دهد.سلول‌ها با پروپیدیوم یدید (PI) و Hoechst 33342 رنگ‌آمیزی شدند تا جمعیت سلولی مرده و جمعیت کل سلول را مشخص کنند.Countstar Rigel یک روش کمی و سریع برای ارزیابی کارایی بیان GFP و قابلیت زنده ماندن به طور همزمان ارائه می دهد.(شکل 4)
شکل 4: سلول ها با استفاده از Hoechst 33342 (آبی) قرار گرفته اند و درصد سلول های بیان کننده GFP (سبز) را به راحتی می توان تعیین کرد.سلول های غیر قابل زنده با پروپیدیوم یدید (قرمز PI) رنگ آمیزی می شوند.
زنده ماندن و تعداد سلول
شمارش دوگانه فلورسانس AO/PI نوع سنجشی است که برای تشخیص غلظت سلولی، زنده ماندن استفاده می شود.با توجه به نوع سلول های مختلف به شمارش رده سلولی و شمارش سلول اولیه تقسیم می شود.محلول حاوی ترکیبی از رنگ اسید نوکلئیک سبز فلورسنت، نارنجی آکریدین و رنگ اسید نوکلئیک قرمز فلورسنت، پروپیدیوم یدید است.پروپیدیوم یدید یک رنگ حذف غشایی است که فقط وارد سلول‌هایی می‌شود که غشاهای آسیب‌دیده دارند در حالی که آکریدین نارنجی به تمام سلول‌های یک جمعیت نفوذ می‌کند.هنگامی که هر دو رنگ در هسته وجود دارند، یدید پروپیدیوم باعث کاهش فلورسانس نارنجی آکریدین با انتقال انرژی رزونانس فلورسانس (FRET) می شود.در نتیجه، سلول‌های هسته‌دار با غشای سالم رنگ سبز فلورسنت می‌کنند و به‌عنوان زنده شمرده می‌شوند، در حالی که سلول‌های هسته‌دار با غشاهای آسیب‌دیده فقط قرمز فلورسنت را رنگ می‌کنند و هنگام استفاده از سیستم Countstar Rigel به عنوان مرده محسوب می‌شوند.مواد غیر هسته ای مانند گلبول های قرمز، پلاکت ها و باقی مانده ها فلورسانس نمی کنند و توسط نرم افزار Countstar Rigel نادیده گرفته می شوند.(شکل 5)
شکل 5: Countstar یک روش رنگ‌آمیزی با فلورسانس دوگانه را برای تعیین ساده و دقیق غلظت و زنده ماندن PBMC بهینه کرده است.نمونه های رنگ آمیزی شده با AO/PI را می توان با Counstar Rigel آنالیز کرد
