پروتکل آزمایشی
درصد سمیت سلولی با معادله زیر محاسبه می شود.
سمیت سلولی % = (تعداد زنده کنترل - تعداد زنده تیمار شده) / تعداد زنده کنترل × 100
با برچسب گذاری سلول های تومور هدف با کلسین AM غیر سمی و غیر رادیواکتیو یا ترانسفکت با GFP، می توانیم کشتن سلول های تومور را توسط سلول های CAR-T کنترل کنیم.در حالی که سلول‌های سرطانی هدف زنده توسط کلسین سبز AM یا GFP برچسب‌گذاری می‌شوند، سلول‌های مرده نمی‌توانند رنگ سبز را حفظ کنند.Hoechst 33342 برای رنگ آمیزی تمام سلول ها (هم سلول های T و هم سلول های تومور) استفاده می شود، در عوض، سلول های تومور هدف را می توان با کلسین AM متصل به غشاء رنگ آمیزی کرد، PI برای رنگ آمیزی سلول های مرده (هم سلول های T و هم سلول های تومور) استفاده می شود.این استراتژی رنگ آمیزی امکان تشخیص سلول های مختلف را فراهم می کند.
E: سمیت سلولی وابسته به نسبت T K562
نمونه Hoechst 33342، CFSE، تصاویر فلورسنت PI سلول های هدف K562 در t = 3 ساعت هستند.
تصاویر فلورسنت حاصل افزایش سلول های هدف Hoechst+CFSE+PI+ را با افزایش نسبت E:T نشان داد.
