Suspensiossa soluja sisältävä näyte sekoitetaan trypaaninsinisen väriaineen kanssa ja vedetään sitten Countstar Automated Cell Counterin analysoimaan Countstar Chamber Slide -levyyn.Klassiseen trypaaninsinisten solujen laskentaperiaatteeseen perustuvissa Countstarin instrumenteissa on edistynyt optinen kuvantamistekniikka, älykäs kuvantunnistustekniikka ja tehokkaat ohjelmistoalgoritmit, jotka eivät ainoastaan tarjoa solujen pitoisuutta ja elinkelpoisuutta, vaan tarjoavat myös tietoa solujen pitoisuudesta, elinkelpoisuudesta, aggregaationopeudesta ja pyöreydestä. , ja halkaisijajakautuma vain yhdellä ajolla.
Aggregoitu soluanalyysi
Kuva 3 Aggregoituneiden solujen laskenta.
A. Kuva solunäytteestä;
B. Kuva solunäytteestä tunnistusmerkillä Countstar BioTech -ohjelmistosta.(Vihreä ympyrä: elävä solu, keltainen ympyrä: kuollut solu, punainen ympyrä: aggregoitu solu).
C. Aggregoitu histogrammi
Jotkut primäärisolut tai alaviljelmäsolut ovat alttiita aggregoitumaan huonossa viljelytilassa tai liiallisessa sulatuksessa, mikä aiheuttaa suuria vaikeuksia solujen laskennassa.Aggregaatiokalibrointitoiminnon avulla Countstar voi toteuttaa aggregaatioiden stimulaatiolaskelman varmistaakseen tarkan solulaskennan ja saada aggregaationopeuden ja aggregaatiohistogrammin, mikä tarjoaa perustan kokeilijoille solujen tilan arvioimiseen.
Solujen kasvun seuranta
Kuva 4 Solujen kasvukäyrä.
Solukasvukäyrä on yleinen menetelmä solujen lukumäärän absoluuttisen kasvun mittaamiseksi, tärkeä indikaattori solupitoisuuden määrittämisessä ja yksi solujen biologisten perusominaisuuksien viljelyn perusparametreista.Jotta voidaan kuvata tarkasti solujen lukumäärän dynaamista muutosta koko prosessin aikana, tyypillinen kasvukäyrä voidaan jakaa 4 osaan: inkubaatioaika hitaan kasvun kanssa;eksponentiaalinen kasvuvaihe, jossa on suuri kaltevuus, tasannevaihe ja laskujakso.Solukasvukäyrä voidaan saada piirtämällä elävien solujen lukumäärä (10 000/ml) viljelyajan (h tai d) funktiona.
Solupitoisuuden ja elinkelpoisuuden mittaaminen
Kuvio 1 Countstar BioTech sieppasi kuvat, kun solut (Vero, 3T3, 549, B16, CHO, Hela, SF9 ja MDCK) värjättiin vastaavasti Trypan Bluella suspensiossa.
Countstar soveltuu soluille, joiden halkaisija on 5-180 um, kuten nisäkässolut, hyönteissolut ja jotkut planktonit.
Solun koon mittaus
Kuvio 2 CHO-solujen solukoon mittaus ennen ja jälkeen plasmiditransfektion.
A. Kuvia CHO-solususpensiosta, joka on värjätty trypaanisinisellä ennen ja jälkeen plasmiditransfektion.
B. CHO-solukoon histogrammin vertailu ennen plasmiditransfektiota ja sen jälkeen.
Solukoon muutos on keskeinen piirre ja sitä mitataan yleisesti solututkimuksessa.Normaalisti se mitataan näissä kokeissa: solutransfektio, lääketesti ja soluaktivaatiomääritykset.Countstar tarjoaa tilastollisia morfologiatietoja, kuten solujen koot, 20 sekunnissa.
Automaattinen Countstar-solulaskuri voi antaa solujen morfologiset tiedot, mukaan lukien ympyrä- ja halkaisijahistogrammit.
