Le système combine le cytomètre d'image et le compteur de cellules en un seul instrument de paillasse.Ce système d'imagerie cellulaire compact et automatisé axé sur les applications fournit une solution tout-en-un pour la recherche sur les cellules cancéreuses, y compris le comptage des cellules, la viabilité (AO/PI, bleu trypan), l'apoptose (Annexin V-FITC/PI), la cellule cycle (PI) et transfection GFP/RFP.
Résumé
Le cancer est l'une des principales causes de décès dans le monde et le développement de nouvelles méthodes de traitement du cancer revêt une grande importance.La cellule cancéreuse est l'objet de recherche fondamentale du cancer, diverses informations doivent être évaluées à partir de la cellule cancéreuse.Ce domaine de recherche nécessite une analyse cellulaire rapide, fiable, simple et détaillée.Le système fournit une plate-forme de solution simple pour l'analyse des cellules cancéreuses.
Étudier l'apoptose des cellules cancéreuses par Countstar Rigel
Les tests d'apoptose sont couramment utilisés dans de nombreux laboratoires à des fins diverses, allant de l'évaluation de la santé des cultures cellulaires à l'évaluation de la toxicité d'un panel de composés.
Le test d'apoptose est un type utilisé pour déterminer le pourcentage d'apoptose des cellules par la méthode de coloration à l'annexine V-FITC/PI.L'annexine V se lie à la phosphatidylsérine (PS) avec une cellule d'apoptose précoce ou une cellule de nécrose.PI ne pénètre que dans les cellules apoptotiques nécrotiques/à un stade très avancé.(Figure 1)
A： Apoptose précoce Annexine V (+), PI (-)
B：Apoptose tardive Annexine V (+), PI (+)
Figure 1 : Détails agrandis des images Countstar Rigel (grossissement 5 x) de 293 cellules, traitées avec l'annexine V FITC et PI
Analyse du cycle cellulaire des cellules cancéreuses
Le cycle cellulaire ou cycle de division cellulaire est la série d'événements qui se déroulent dans une cellule conduisant à sa division et à la duplication de son ADN (réplication de l'ADN) pour produire deux cellules filles.Dans les cellules à noyau, comme chez les eucaryotes, le cycle cellulaire est également divisé en trois périodes : l'interphase, la phase mitotique (M) et la cytokinèse.L'iodure de propidium (PI) est un colorant de coloration nucléaire fréquemment utilisé pour mesurer le cycle cellulaire.Parce que le colorant ne peut pas pénétrer dans les cellules vivantes, les cellules sont fixées avec de l'éthanol avant la coloration.Toutes les cellules sont ensuite colorées.Les cellules se préparant à la division contiendront des quantités croissantes d'ADN et afficheront une fluorescence proportionnellement accrue.Les différences d'intensité de fluorescence sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules dans chaque phase du cycle cellulaire. peut capturer l'image et les résultats seront affichés dans le logiciel FCS express.(Figure 2)
Figure 2 : MCF-7 (A) et 293T (B) ont été colorés avec le kit de détection du cycle cellulaire avec PI, les résultats ont été déterminés par Countstar Rigel et analysés par FCS express.
Viabilité et détermination de la transfection GFP dans la cellule
Au cours du bioprocédé, la GFP est souvent utilisée pour fusionner avec une protéine recombinante comme indicateur.Déterminer que la fluorescence GFP peut refléter l'expression de la protéine cible. offre un test simple et rapide pour tester la transfection GFP ainsi que la viabilité.Les cellules ont été colorées avec de l'iodure de propidium (PI) et du Hoechst 33342 pour définir la population de cellules mortes et la population totale de cellules. propose une méthode quantitative rapide pour évaluer simultanément l'efficacité et la viabilité de l'expression de la GFP.(Figure 4)
Figure 4 : Les cellules sont localisées à l'aide de Hoechst 33342 (bleu) et le pourcentage de cellules exprimant la GFP (vert) peut être facilement déterminé.Les cellules non viables sont colorées avec de l'iodure de propidium (PI; rouge).
Viabilité et nombre de cellules
Le comptage à double fluorescence AO/PI est le type de test utilisé pour détecter la concentration et la viabilité des cellules.Il s'est divisé en comptage de lignées cellulaires et en comptage de cellules primaires selon différents types de cellules.La solution contient une combinaison du colorant d'acide nucléique fluorescent vert, orange d'acridine, et du colorant d'acide nucléique fluorescent rouge, iodure de propidium.L'iodure de propidium est un colorant d'exclusion membranaire qui ne pénètre que dans les cellules dont les membranes sont compromises, tandis que l'orange d'acridine pénètre dans toutes les cellules d'une population.Lorsque les deux colorants sont présents dans le noyau, l'iodure de propidium provoque une réduction de la fluorescence orange de l'acridine par transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET).En conséquence, les cellules nucléées avec des membranes intactes se colorent en vert fluorescent et sont comptées comme vivantes, tandis que les cellules nucléées avec des membranes compromises ne se colorent qu'en rouge fluorescent et sont comptées comme mortes lors de l'utilisation du système .Les matériaux non nucléés tels que les globules rouges, les plaquettes et les débris ne sont pas fluorescents et sont ignorés par le logiciel .(Figure 5)
Figure 5 : a optimisé une méthode de coloration à double fluorescence pour une détermination simple et précise de la concentration et de la viabilité des PBMC.Les échantillons colorés avec AO/PI peuvent être analysés avec le Counstar Rigel
