Le comptage à double fluorescence AOPI est le type de test utilisé pour détecter la concentration et la viabilité des cellules.La solution est une combinaison d'orange d'acridine (la coloration verte fluorescente de l'acide nucléique) et d'iodure de propidium (la coloration rouge fluorescente de l'acide nucléique).L'iodure de propidium (PI) est un colorant d'exclusion membranaire qui ne pénètre que dans les cellules dont les membranes sont compromises, tandis que l'acridine orange est capable de pénétrer dans toutes les cellules d'une population.Lorsque les deux colorants sont présents dans le noyau, l'iodure de propidium provoque une réduction de la fluorescence orange de l'acridine par transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET).En conséquence, les cellules nucléées avec des membranes intactes se colorent en vert fluorescent et sont comptées comme vivantes, tandis que les cellules nucléées avec des membranes compromises ne se colorent qu'en rouge fluorescent et sont comptées comme mortes lors de l'utilisation du système ® FL.Les matériaux non nucléés tels que les globules rouges, les plaquettes et les débris ne sont pas fluorescents et sont ignorés par le logiciel ® FL.
Processus de thérapie par cellules souches
Figure 4 Surveillance de la viabilité et du nombre de cellules des cellules souches mésenchymateuses (MSC) pour une utilisation dans les thérapies cellulaires.
Déterminer la viabilité des MSC par dosage AO/PI et Trypan Blue
Figure 2. A. Image de MSC colorée par AO/PI et Trypan Blue ;2. Comparaison des résultats AO/PI et bleu Trypan avant et après transport.
L'indice de réfraction cellulaire change, la coloration au bleu Trypan n'était pas si évidente, il est difficile de déterminer la viabilité après transport.Alors que la fluorescence bicolore permet la coloration des cellules nucléées vivantes et mortes, générant des résultats de viabilité précis même en présence de débris, de plaquettes et de globules rouges.
