It Countstar-systeem kombinearret de ôfbyldingscytometer en selteller yn ien ynstrumint mei ien bankje.Dit applikaasje-oandreaune, kompakte en automatisearre selôfbyldingsysteem biedt in alles-yn-ien oplossing foar ûndersyk nei kankersellen, ynklusyf seltelling, leefberens (AO/PI, trypanblau), apoptose (Annexin V-FITC/PI), sel syklus (PI), en GFP / RFP transfeksje.
Abstrakt
Kanker is ien fan 'e wichtichste deadsoarsaken wrâldwiid, en de ûntwikkeling fan nije metoaden foar kankerbehanneling is fan grutte betsjutting.Kankersel is it basisûndersyksobjekt fan kanker, ferskate ynformaasje moat wurde evaluearre út 'e kankersel.Dit ûndersyksgebiet hat rappe, betroubere, ienfâldige en detaillearre selanalyse nedich.Countstar-systeem biedt in ienfâldige oplossingsplatfoarm foar analyse fan kankersellen.
Studearje Cancer Cell Apoptosis troch Countstar Rigel
Apoptose-assays wurde regelmjittich brûkt yn in protte laboratoaria foar ferskate doelen, fan it beoardieljen fan 'e sûnens fan selkultueren oant it evaluearjen fan' e toxiciteit fan in paniel fan ferbiningen.
Apoptosis assay is in type brûkt foar it bepalen fan it apoptose persintaazje fan sellen troch Annexin V-FITC / PI kleuring metoade.Annexin V bindet oan fosfatidylserine (PS) mei iere apoptose-sel of nekrose-sel.PI komt allinich nekrotyske / heul lette apoptotyske sellen yn.(Figuer 1)
A: Early apoptosis Annexin V (+), PI (-)
B: Lette apoptose Annexin V (+), PI (+)
Ofbylding 1: Fergrutte details fan Countstar Rigel-ôfbyldings (5 x fergrutting) fan 293 sellen, behannele mei Annexin V FITC en PI
Cell Cycle Analyse fan Cancer Cell
De sel-syklus of sel-divyzje-syklus is de searje fan eveneminten dy't plakfine yn in sel dy't liedt ta syn divyzje en duplikaasje fan syn DNA (DNA-replikaasje) om twa dochtersellen te produsearjen.Yn sellen mei in kearn, lykas yn eukaryoten, is de selsyklus ek ferdield yn trije perioaden: ynterfase, de mitotyske (M) faze, en cytokinesis.Propidium iodide (PI) is in nukleêre kleurstof dy't faak wurdt brûkt om selsyklus te mjitten.Om't de kleurstof net yn libbene sellen kin komme, wurde de sellen fêst mei ethanol foarôfgeand oan it kleurjen.Alle sellen wurde dan kleurd.Sellen dy't har tariede op divyzje sille tanimmende hoemannichten DNA befetsje en proporsjoneel ferhege fluoreszinsje werjaan.Ferskillen yn fluoreszinsje-yntensiteit wurde brûkt om it persintaazje sellen yn elke faze fan 'e selsyklus te bepalen.Countstar kin de ôfbylding opnimme en resultaten sille wurde werjûn yn FCS express software.(ôfbylding 2)
Figuer 2: MCF-7 (A) en 293T (B) waarden kleurd mei selsyklus Detection Kit mei PI, de resultaten waarden bepaald troch Countstar Rigel, en analysearre troch FCS express.
Bepaling fan leefberens en GFP-transfeksje yn sel
Tidens it bioproses wurdt GFP faak brûkt om te fusearjen mei rekombinant proteïne as in yndikator.Bepale de GFP fluorescent kin wjerspegelje de doelprotein ekspresje.Countstar Rigel biedt in rappe en ienfâldige assay foar testen fan GFP-transfeksje en ek leefberens.Sellen waarden kleurd mei Propidium iodide (PI) en Hoechst 33342 om de deade selpopulaasje en totale selpopulaasje te definiearjen.Countstar Rigel biedt in flugge, kwantitative metoade foar it evaluearjen fan GFP-ekspresje-effisjinsje en leefberens tagelyk.(ôfbylding 4)
Figuer 4: Sellen wurde pleatst mei Hoechst 33342 (blau) en it persintaazje GFP-ekspresje sellen (grien) kin maklik wurde bepaald.Nonviable sel wurde kleurd mei propidium iodide (PI; read).
Viability en Cell Count
AO / PI Dual-fluoresces tellen is it assaytype dat wurdt brûkt foar it opspoaren fan selkonsintraasje, leefberens.It is ferdield yn selline tellen en primêre sel tellen neffens ferskate seltype.De oplossing befettet in kombinaasje fan de grien-fluorescent nucleic acid stain, acridine oranje, en de redfluorescent nucleic acid stain, propidium iodide.Propidium iodide is in membraan útsluting kleurstof dy't allinnich komt yn sellen mei kompromittearre membranen wylst acridine oranje penetrates alle sellen yn in populaasje.As beide kleurstoffen oanwêzich binne yn 'e kearn, feroarsake propidiumjodide in reduksje yn acridine oranje fluorescence troch fluorescence resonance energy transfer (FRET).As gefolch, nucleated sellen mei yntakt membranen kleurje fluorescent grien en wurde teld as libbene, wylst nucleated sellen mei kompromittearre membranen allinne kleurje fluorescent read en wurde teld as dea by it brûken fan it Countstar Rigel systeem.Non-nucleated materiaal lykas reade bloedsellen, bloedplaatjes en pún fluoressje net en wurde negearre troch de Countstar Rigel software.(ôfbylding 5)
Figuer 5: Countstar hat in dual-fluorescence kleuringsmetoade optimalisearre foar ienfâldige, krekte bepaling fan PBMC-konsintraasje en leefberens.Samples kleurd mei AO / PI kinne wurde analysearre mei de Countar Rigel
