It analysearjen fan de leukozyten yn folslein bloed is in routine assay yn klinysk laboratoarium as bloedbank.De konsintraasje en leefberens fan 'e leukozyten binne de fitale yndeks as kwaliteitskontrôle fan bloedopslach.Utsein leukozyten befettet folslein bloed in grut oantal bloedplaatjes, reade bloedsellen, of sellulêre ôffal, dy't it ûnmooglik meitsje om folslein bloed direkt ûnder de mikroskoop of ljochtfjildselteller te analysearjen.Konvinsjonele metoaden om wite bloedsellen te tellen befetsje RBC-lysisproses, dat is tiidslinend.
AOPI Dual-fluoresces tellen is it assaytype dat wurdt brûkt foar it opspoaren fan selkonsintraasje en leefberens.De oplossing is in kombinaasje fan acridine oranje (de grien-fluorescent nucleic acid stain) en propidium iodide (de read-fluorescent nucleic acid stain).Propidium iodide (PI) is in membraan útsluting kleurstof dy't allinnich komt yn sellen mei kompromittearre membranen, wylst acridine oranje is by steat om te penetrearje alle sellen yn in befolking.As beide kleurstoffen oanwêzich binne yn 'e kearn, feroarsake propidiumjodide in reduksje yn acridine oranje fluorescence troch fluorescence resonance energy transfer (FRET).As gefolch, nucleated sellen mei yntakt membranen kleurje fluorescent grien en wurde rekkene as live, wylst nucleated sellen mei kompromittearre membranen allinne kleurje fluorescent read en wurde teld as dea by it brûken fan it Countstar® Rigel systeem.
Countstar Rigel is in ideale oplossing foar in protte komplekse selpopulaasjekarakterisaasje-assays, wêrtroch wite bloedsellen yn folslein bloed fluch kinne analysearje.
Eksperimintele proseduere:
1.Nim 20 µl bloedmonster en ferwiderje it probleem yn 180 µl PBS.
2.Add 12µl AO / PI oplossing yn 12µl sample, sêft mingd mei pipette;
3.Draw 20µl mingsel yn keamer slide;
4.Low de sellen om yn 'e keamer te setten foar sawat 1 minút;
5.Insect de slide yn Countstar FL ynstrumint;
6.Kies de "AO / PI Viability" assay, dan Fier Sample ID foar dizze stekproef.
7.Selektearje Dilution ratio, Cell Type, de klik 'Run' om de test te begjinnen.
Foarsichtich: AO en PI binne in potinsjele karzinogen.It wurdt oanrikkemandearre dat de operator persoanlike beskermjende apparatuer (PPE) draacht om direkt kontakt mei hûd en eagen te foarkommen.
Resultaat:
1. Bright Field Image fan folslein bloed
Yn it ljochte fjildbyld fan it hiele bloed binne WBC's net te sjen tusken de reade bloedsellen.(Figuer 1)
figuer 1 Helder fjild ôfbylding fan folslein bloed.
2. Fluorescence Image fan folslein bloed
De AO- en PI-ferve binne beide flekken DNA yn 'e selkearn fan sellen.Dêrom binne bloedplaatjes, reade bloedsellen, as sellulêre ôffal net yn steat om leukozytenkonsintraasje en leefberensresultaat te beynfloedzjen.Libjende leukozyten (grien) en deade leukozyten (read) wurde maklik visualisearre yn 'e fluoreszensbylden.(ôfbylding 2)
Figure 2 Fluorescence Images of hiele bloed.(IN).Ofbylding fan AO Channel;(B) Ofbylding fan PI Channel;(C) Meitsje ôfbyldings fan AO en PI Channel gear.
3. Konsintraasje en leefberens fan leukozyten
De Countstar FL-software telt automatysk sellen fan trije keamerseksjes en berekkent gemiddelde wearde fan totale WBC-seltelling (1202), konsintraasje (1,83 x 106 sellen / ml), en% leefberens (82,04%).De folsleine bloedôfbyldings en gegevens kinne maklik wurde eksportearre as PDF, Image of Excel foar ekstra analyse of gegevensargivearring.
Ofbylding 3 Skermprint fan Countstar Rigel Software
