Bidh an siostam Countstar a’ cothlamadh an cytometer ìomhaigh agus cuntair cealla ann an aon ionnstramaid mullach-beinne.Tha an siostam ìomhaighean cealla fèin-ghluasadach, teann agus fèin-ghluasadach seo a’ toirt seachad fuasgladh uile-ann-aon airson sgrùdadh cealla aillse, a’ toirt a-steach cunntadh cealla, comas obrachaidh (AO / PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC / PI), cealla cearcall (PI), agus gluasad GFP/RFP.
Abradh
Is e aillse aon de na prìomh adhbharan bàis air feadh an t-saoghail, agus tha leasachadh dhòighean làimhseachaidh aillse ùra air leth cudromach.Is e cealla aillse prìomh adhbhar rannsachaidh aillse, feumar diofar fhiosrachadh a mheasadh bhon chill aillse.Feumaidh an raon rannsachaidh seo mion-sgrùdadh cealla luath, earbsach, sìmplidh agus mionaideach.Tha siostam Countstar a’ toirt seachad àrd-ùrlar fuasglaidh sìmplidh airson mion-sgrùdadh cealla aillse.
Dèan sgrùdadh air Cancer Cell Apoptosis le Countstar Rigel
Bithear a’ cleachdadh mheasaidhean apoptosis gu cunbhalach ann am mòran deuchainn-lannan airson diofar adhbharan bho bhith a’ measadh slàinte chultaran cealla gu bhith a’ measadh puinnseanta panail de choimeasgaidhean.
Is e seòrsa a th’ ann an assay apoptosis airson a bhith a’ dearbhadh ceudad apoptosis de cheallan a rèir modh staining Annexin V-FITC/PI.Tha Leas-phàipear V a’ ceangal ri phosphatidylserine (PS) le cealla apoptosis tràth no cealla necrosis.Chan eil PI a’ dol a-steach ach ceallan apoptotic necrotic / glè anmoch.(Figear 1)
A: Apoptosis tràth Leas-phàipear V (+), PI (-)
B:Apoptosis anmoch Leas-phàipear V (+), PI (+)
Figear 1: Mion-fhiosrachadh leudaichte mu dhealbhan Countstar Rigel (5 x meudachadh) de cheallan 293, air an làimhseachadh le Annexin V FITC agus PI
Mion-sgrùdadh cearcall cealla de chealla aillse
Is e cearcall cealla no cearcall roinneadh cealla an t-sreath de thachartasan a tha a’ gabhail àite ann an cealla a tha a’ leantainn gu bhith a’ roinneadh agus a’ dùblachadh a DNA (samhlachadh DNA) gus dà chealla nighean a thoirt gu buil.Ann an ceallan le niuclas, mar ann an eukaryotes, tha cearcall nan cealla cuideachd air a roinn ann an trì amannan: interphase, an ìre mitotic (M), agus cytokinesis.Tha Propidium iodide (PI) na dhath staining niùclasach a thathas gu tric air a chleachdadh airson cearcall cealla a thomhas.Leis nach urrainn don dath a dhol a-steach do cheallan beò, tha na ceallan air an suidheachadh le ethanol mus tèid an staining.Tha na ceallan uile an uairsin air an dath.Bidh ceallan a bhios ag ullachadh airson roinneadh a’ toirt a-steach meudan nas motha de DNA agus a’ nochdadh barrachd fluorescence co-rèireach.Bithear a’ cleachdadh eadar-dhealachaidhean ann an dian fluorescence gus an àireamh sa cheud de cheallan anns gach ìre den chearcall cealla a dhearbhadh.Faodaidh Countstar an ìomhaigh a ghlacadh agus thèid na toraidhean a thaisbeanadh ann am bathar-bog luath FCS.(Figear 2)
Figear 2: Chaidh MCF-7 (A) agus 293T (B) a dhath le Kit Lorg cearcall cealla le PI, chaidh na toraidhean a dhearbhadh le Countstar Rigel, agus chaidh an sgrùdadh le FCS express.
Soirbheachas agus Co-dhùnadh Gluasaid GFP ann an Cell
Rè a 'bhith-phròiseas, bidh GFP gu tric air a chleachdadh gus a bhith a' ceangal le pròtain ath-chuingealaichte mar thaisbeanair.Obraich a-mach am faod fluorescent GFP an abairt pròtain targaid a nochdadh.Tha Countstar Rigel a’ tabhann measadh luath is sìmplidh airson a bhith a’ dèanamh deuchainn air tar-chuir GFP a bharrachd air comasachd.Chaidh ceallan a dhath le Propidium iodide (PI) agus Hoechst 33342 gus àireamh nan ceallan marbh agus àireamh-sluaigh iomlan nan ceallan a mhìneachadh.Tha Countstar Rigel a’ tabhann dòigh luath, cainneachdail airson a bhith a’ measadh èifeachdas faireachdainn GFP agus comasachd aig an aon àm.(Figear 4)
Figear 4: Tha ceallan air an suidheachadh le bhith a 'cleachdadh Hoechst 33342 (gorm) agus faodar an àireamh sa cheud de cheallan cur an cèill GFP (uaine) a dhearbhadh gu furasta.Tha ceallan neo-ghluasadach air an dath le propidium iodide (PI; dearg).
Soirbheachas agus cunntadh cealla
AO/PI Is e cunntadh dà-fluoresces an seòrsa assay a thathas a’ cleachdadh gus dùmhlachd cealla, comasachd a lorg.Roinn e ann an cunntadh loidhne cealla agus cunntadh cealla bun-sgoile a rèir diofar seòrsa cealla.Anns an fhuasgladh tha measgachadh den stain searbhag niuclasach uaine-fluorescent, acridine orange, agus an stain searbhag niuclasach dearg-fluorescent, propidium iodide.Is e dath às-dùnadh membran a th’ ann am Propidium iodide nach tèid a-steach ach a-steach do cheallan le buill-bodhaig ann an cunnart fhad ‘s a bhios acridine orange a’ dol a-steach do gach cealla ann an sluagh.Nuair a tha an dà dhath an làthair anns an niuclas, bidh propidium iodide ag adhbhrachadh lùghdachadh ann an fluorescence orains acridine le gluasad lùth ath-shuidheachadh fluorescence (FRET).Mar thoradh air an sin, bidh ceallan nucleated le membran slàn a’ stain uaine flùraiseach agus tha iad air an cunntadh mar dhaoine beò, ach chan eil ceallan nucleated le buill-bodhaig cuibhrichte ach a ’cumail dearg flùraiseach agus air an cunntadh mar marbh nuair a bhios iad a’ cleachdadh siostam Countstar Rigel.Cha bhith stuthan neo-niùclaichte leithid ceallan fala dearga, truinnsearan agus sprùilleach a’ sruthadh agus tha bathar-bog Countstar Rigel a’ toirt aire dhaibh.(Figear 5)
Figear 5: Tha Countstar air dòigh staining dà-fhlùraichean a bharrachadh airson dearbhadh sìmplidh, ceart air dùmhlachd agus comas obrachaidh PBMC.Faodar sampaill air an dath le AO/PI a sgrùdadh leis an Counstar Rigel
