Tha mion-sgrùdadh air leukocytes san fhuil gu lèir na mheasadh àbhaisteach ann an deuchainnlann clionaigeach no banca fala.Is e dùmhlachd agus comasachd nan leukocytes an clàr-amais deatamach mar smachd càileachd air stòradh fala.A bharrachd air leukocyte, tha àireamh mhòr de phlàtaichean, ceallan fala dearga, no sprùilleach cealla ann am fuil slàn, a tha ga dhèanamh do-dhèanta fuil slàn a sgrùdadh gu dìreach fon mhiocroscop no cuntair cealla achaidh soilleir.Tha dòighean àbhaisteach airson ceallan fala geal a chunntadh a’ toirt a-steach pròiseas lysis RBC, a bheir ùine.
Is e cunntadh dà-fluoresces AOPI an seòrsa assay a thathas a’ cleachdadh gus dùmhlachd cealla agus comasachd a lorg.Is e am fuasgladh measgachadh de acridine orange (an stain searbhag niuclasach uaine-fluorescent) agus propidium iodide (an stain searbhag niuclasach dearg-fluorescent).Is e dath às-dùnadh membran a th’ ann am Propidium iodide (PI) a bhios a’ dol a-steach do cheallan le buill-bodhaig a-mhàin, fhad ‘s a tha acridine orange comasach air a dhol a-steach do gach cealla ann an sluagh.Nuair a tha an dà dhath an làthair anns an niuclas, bidh propidium iodide ag adhbhrachadh lùghdachadh ann an fluorescence orains acridine le gluasad lùth ath-shuidheachadh fluorescence (FRET).Mar thoradh air an sin, bidh ceallan nucleated le buill-bodhaig slàn a’ stain uaine flùraiseach agus tha iad air an cunntadh mar beò, ach chan eil ceallan nucleated le buill-bodhaig co-rèiteachaidh a ’cumail ach dearg flùraiseach agus thathas gam cunntadh mar marbh nuair a bhios iad a’ cleachdadh siostam Countstar® Rigel.
Tha Countstar Rigel na fhìor fhuasgladh airson mòran de mheasaidhean caractar àireamh-sluaigh cealla iom-fhillte, comasach air ceallan fala geal ann am fuil slàn a sgrùdadh gu sgiobalta.
Modh-obrach deuchainneach:
1. Gabh 20 µl de shampall fala agus caolaich an sampall ann an 180 µl de PBS.
2.Cuir fuasgladh 12µl AO/PI ann an sampall 12µl, measgachadh gu socair le pìob;
3.Tarraing measgachadh 20µl a-steach do shleamhnag seòmar;
4.Leig leis na ceallan socrachadh san t-seòmar airson timcheall air 1 mionaid;
5.Insect an sleamhnag a-steach gu inneal Countstar FL;
6.Tagh an assay “AO / PI Viability”, an uairsin cuir a-steach Sample ID airson an sampall seo.
7.Select Dilution co-mheas, Cell Type, an cliog 'Run' gus tòiseachadh air an deuchainn.
Rabhadh: Tha AO agus PI nan carcinogen a dh’fhaodadh a bhith ann.Thathas a’ moladh gum bi an gnìomhaiche a’ caitheamh uidheamachd dìon pearsanta (PPE) gus conaltradh dìreach le craiceann is sùilean a sheachnadh.
Toradh:
1. Bright Field Ìomhaigh de fhuil slàn
Anns an ìomhaigh achaidh shoilleir den fhuil gu lèir, chan eil WBCan rim faicinn am measg na cealla fola dearga.(Figear 1)
Figear 1 Ìomhaigh achaidh soilleir de fhuil slàn.
2. Fluorescence Ìomhaigh de fhuil slàn
Tha an dath AO agus PI le chèile nan stains DNA ann an niuclas cealla nan ceallan.Mar sin, chan urrainn dha platelets, ceallan fala dearga, no sprùilleach cealla buaidh a thoirt air dùmhlachd leukocytes agus toradh ion-obrachaidh.Tha leukocytes beò (Uaine) agus leukocytes marbh (dearg) furasta am faicinn anns na h-ìomhaighean fluorescence.(Figear 2)
Figear 2 Fluorescence Ìomhaighean de fhuil slàn.(A).Ìomhaigh de Sianal AO;(B) Ìomhaigh de PI Channel;(C) Cuir còmhla ìomhaighean de AO agus Sianal PI.
3. Dùmhlachd agus ion-obrachadh leukocytes
Bidh bathar-bog Countstar FL gu fèin-ghluasadach a’ cunntadh cheallan de thrì earrannan seòmar agus a’ tomhas luach cuibheasach cunntais cealla iomlan WBC (1202), dùmhlachd (1.83 x 106 ceallan / ml), agus % comasachd (82.04%).Faodar na h-ìomhaighean fala agus an dàta gu lèir a chuir a-mach gu furasta mar PDF, Ìomhaigh no Excel airson mion-sgrùdadh a bharrachd no tasglann dàta.
Figear 3 Glacadh-sgrìn de bhathar-bog Countstar Rigel
