Protocolo experimental
O % de citotoxicidade calcúlase coa seguinte ecuación.
% de citotoxicidade = (Recontos vivos de control – Recuentos vivos de tratados)/Recontos vivos de control × 100
Ao marcar as células tumorais diana con calceína AM non tóxica e non radioactiva ou transfectar con GFP, podemos supervisar a morte das células tumorais polas células CAR-T.Aínda que as células cancerosas diana vivas serán etiquetadas cunha calceína verde AM ou GFP, as células mortas non poden reter o colorante verde.Hoechst 33342 utilízase para tinguir todas as células (tanto células T como células tumorais), alternativamente, as células tumorais diana pódense tinguir con calceína AM unida a membrana, e PI úsase para tinguir as células mortas (tanto as células T como as células tumorais).Esta estratexia de tinción permite discriminar diferentes células.
E: T Citotoxicidade dependente da relación de K562
O exemplo de imaxes fluorescentes de Hoechst 33342, CFSE, PI son as células diana K562 a t = 3 horas
As imaxes fluorescentes resultantes mostraron un aumento das células diana Hoechst+CFSE+PI+ a medida que aumentaba a relación E:T
