કેન્સર સેલ સંશોધનમાં કાઉન્ટસ્ટારની એપ્લિકેશન્સ

કાઉન્ટસ્ટાર સિસ્ટમ ઇમેજ સાયટોમીટર અને સેલ કાઉન્ટરને સિંગલ બેન્ચ-ટોપ ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટમાં જોડે છે.આ એપ્લિકેશન-સંચાલિત, કોમ્પેક્ટ અને સ્વયંસંચાલિત સેલ ઇમેજિંગ સિસ્ટમ કેન્સર કોષ સંશોધન માટે એક સર્વસામાન્ય ઉકેલ પૂરો પાડે છે, જેમાં સેલ કાઉન્ટિંગ, સધ્ધરતા (AO/PI, ટ્રિપન બ્લુ), એપોપ્ટોસિસ (Annexin V-FITC/PI), સેલનો સમાવેશ થાય છે. ચક્ર (PI), અને GFP/RFP ટ્રાન્સફેક્શન.

અમૂર્ત

કેન્સર એ વિશ્વભરમાં મૃત્યુના મુખ્ય કારણોમાંનું એક છે, અને કેન્સરની સારવારની નવી પદ્ધતિઓનો વિકાસ ખૂબ મહત્વ ધરાવે છે.કેન્સર સેલ એ કેન્સરનું મૂળ સંશોધન પદાર્થ છે, કેન્સર સેલમાંથી વિવિધ માહિતીનું મૂલ્યાંકન કરવાની જરૂર છે.આ સંશોધન ક્ષેત્રને ઝડપી, વિશ્વસનીય, સરળ અને વિગતવાર કોષ વિશ્લેષણની જરૂર છે.કાઉન્ટસ્ટાર સિસ્ટમ કેન્સર સેલ વિશ્લેષણ માટે સરળ ઉકેલ પ્લેટફોર્મ પ્રદાન કરે છે.

કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ દ્વારા કેન્સર સેલ એપોપ્ટોસિસનો અભ્યાસ કરો

ઘણા પ્રયોગશાળાઓમાં એપોપ્ટોસીસ એસેસનો નિયમિત ઉપયોગ કોષ સંસ્કૃતિના સ્વાસ્થ્યનું મૂલ્યાંકન કરવાથી લઈને સંયોજનોની પેનલની ઝેરી અસરનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે વિવિધ હેતુઓ માટે કરવામાં આવે છે.
એપોપ્ટોસિસ એસે એ એક પ્રકાર છે જેનો ઉપયોગ એનેક્સિન V-FITC/PI સ્ટેનિંગ પદ્ધતિ દ્વારા કોષોની એપોપ્ટોસિસ ટકાવારી નક્કી કરવા માટે થાય છે.એનેક્સિન V પ્રારંભિક એપોપ્ટોસીસ કોષ અથવા નેક્રોસિસ કોષ સાથે ફોસ્ફેટીડીલસરીન (પીએસ) સાથે જોડાય છે.PI માત્ર નેક્રોટિક/ખૂબ જ લેટ-સ્ટેજ એપોપ્ટોટિક કોષોમાં પ્રવેશ કરે છે.(આકૃતિ 1)

A: પ્રારંભિક એપોપ્ટોસિસ એનેક્સિન V (+), PI (-)

B: અંતમાં એપોપ્ટોસિસ એનેક્સિન V (+), PI (+)

આકૃતિ1: 293 કોષોના કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ ચિત્રો (5 x વિસ્તૃતીકરણ) ની વિસ્તૃત વિગતો, જેને Annexin V FITC અને PI સાથે સારવાર આપવામાં આવી છે.

કેન્સર સેલનું સેલ ચક્ર વિશ્લેષણ

કોષ ચક્ર અથવા કોષ-વિભાજન ચક્ર એ ઘટનાઓની શ્રેણી છે જે કોષમાં થાય છે જે તેના વિભાજન તરફ દોરી જાય છે અને તેના ડીએનએ (ડીએનએ પ્રતિકૃતિ) નું ડુપ્લિકેશન બે પુત્રી કોષો ઉત્પન્ન કરે છે.ન્યુક્લિયસ સાથેના કોષોમાં, યુકેરીયોટ્સની જેમ, કોષ ચક્રને પણ ત્રણ સમયગાળામાં વિભાજિત કરવામાં આવે છે: ઇન્ટરફેસ, મિટોટિક (M) તબક્કો અને સાયટોકીનેસિસ.પ્રોપીડિયમ આયોડાઈડ (PI) એ ન્યુક્લિયર સ્ટેનિંગ ડાઈ છે જેનો વારંવાર સેલ સાયકલ માપવા માટે ઉપયોગ થાય છે.કારણ કે રંગ જીવંત કોષોમાં પ્રવેશી શકતો નથી, સ્ટેનિંગ પહેલાં કોષોને ઇથેનોલ સાથે નિશ્ચિત કરવામાં આવે છે.પછી બધા કોષો ડાઘવાળા હોય છે.વિભાજન માટે તૈયારી કરી રહેલા કોષોમાં ડીએનએની વધતી જતી માત્રા હશે અને પ્રમાણસર વધેલી ફ્લોરોસેન્સ દર્શાવશે.કોષ ચક્રના દરેક તબક્કામાં કોષોની ટકાવારી નક્કી કરવા માટે ફ્લોરોસેન્સની તીવ્રતામાં તફાવતનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે.કાઉન્ટસ્ટાર ઇમેજ કેપ્ચર કરી શકે છે અને પરિણામો FCS એક્સપ્રેસ સોફ્ટવેરમાં પ્રદર્શિત થશે.(આકૃતિ 2)

આકૃતિ 2: MCF-7 (A) અને 293T (B) ને PI સાથે સેલ સાયકલ ડિટેક્શન કિટ સાથે સ્ટેન કરવામાં આવ્યા હતા, પરિણામો કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા, અને FCS એક્સપ્રેસ દ્વારા વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.

સેલમાં સધ્ધરતા અને GFP ટ્રાન્સફેક્શન નિર્ધારણ

બાયોપ્રોસેસ દરમિયાન, GFP નો ઉપયોગ વારંવાર સૂચક તરીકે રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીન સાથે જોડાણ કરવા માટે થાય છે.GFP ફ્લોરોસન્ટ લક્ષ્ય પ્રોટીન અભિવ્યક્તિને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે તે નક્કી કરો.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ GFP ટ્રાન્સફેક્શન તેમજ સધ્ધરતાના પરીક્ષણ માટે ઝડપી અને સરળ પરીક્ષા આપે છે.મૃત કોષની વસ્તી અને કુલ કોષની વસ્તીને વ્યાખ્યાયિત કરવા માટે કોષોને પ્રોપીડિયમ આયોડાઇડ (PI) અને Hoechst 33342 થી ડાઘવામાં આવ્યા હતા.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ એક જ સમયે GFP અભિવ્યક્તિ કાર્યક્ષમતા અને સદ્ધરતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે ઝડપી, માત્રાત્મક પદ્ધતિ પ્રદાન કરે છે.(આકૃતિ 4)

આકૃતિ 4: કોષો Hoechst 33342 (વાદળી) નો ઉપયોગ કરીને સ્થિત છે અને GFP વ્યક્ત કરતા કોષોની ટકાવારી (લીલા) સરળતાથી નક્કી કરી શકાય છે.બિન-વ્યવસ્થિત કોષ પ્રોપિડિયમ આયોડાઇડ (PI; લાલ) થી રંગીન હોય છે.

સદ્ધરતા અને સેલ કાઉન્ટ

AO/PI ડ્યુઅલ-ફ્લોરેસેસ કાઉન્ટિંગ એ કોષની સાંદ્રતા, સદ્ધરતા શોધવા માટે વપરાતો એસે પ્રકાર છે.તે વિવિધ કોષ પ્રકાર અનુસાર સેલ લાઇન ગણતરી અને પ્રાથમિક કોષ ગણતરીમાં વિભાજિત થાય છે.સોલ્યુશનમાં ગ્રીન-ફ્લોરોસન્ટ ન્યુક્લીક એસિડ સ્ટેન, એક્રીડિન ઓરેન્જ અને રેડફ્લોરોસન્ટ ન્યુક્લીક એસિડ સ્ટેન, પ્રોપીડિયમ આયોડાઇડનું મિશ્રણ હોય છે.પ્રોપિડીયમ આયોડાઈડ એ પટલનો બાકાત રંગ છે જે માત્ર ચેડા થયેલ પટલવાળા કોષોમાં પ્રવેશે છે જ્યારે એક્રીડીન નારંગી વસ્તીના તમામ કોષોમાં પ્રવેશ કરે છે.જ્યારે બંને રંગો ન્યુક્લિયસમાં હાજર હોય છે, ત્યારે પ્રોપિડિયમ આયોડાઈડ ફ્લોરોસેન્સ રેઝોનન્સ એનર્જી ટ્રાન્સફર (FRET) દ્વારા એક્રીડિન ઓરેન્જ ફ્લોરોસેન્સમાં ઘટાડો કરે છે.પરિણામે, અખંડ પટલ સાથેના ન્યુક્લિએટેડ કોષો ફ્લોરોસન્ટ લીલા રંગના થાય છે અને તેને જીવંત તરીકે ગણવામાં આવે છે, જ્યારે ચેડા થયેલ પટલ સાથેના ન્યુક્લિએટેડ કોષો માત્ર ફ્લોરોસન્ટ લાલ રંગના ડાઘ કરે છે અને કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરતી વખતે મૃત તરીકે ગણવામાં આવે છે.બિન-ન્યુક્લિટેડ સામગ્રી જેમ કે લાલ રક્ત કોશિકાઓ, પ્લેટલેટ્સ અને ભંગાર ફ્લોરોસીસ થતા નથી અને કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સોફ્ટવેર દ્વારા અવગણવામાં આવે છે.(આકૃતિ 5)

આકૃતિ 5: PBMC સાંદ્રતા અને સદ્ધરતાના સરળ, સચોટ નિર્ધારણ માટે કાઉન્ટસ્ટારે ડ્યુઅલ-ફ્લોરોસેન્સ સ્ટેનિંગ પદ્ધતિને ઑપ્ટિમાઇઝ કરી છે.AO/PI સાથે સ્ટેન કરાયેલા નમૂનાઓનું કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સાથે વિશ્લેષણ કરી શકાય છે