નોવેલ ઇમેજિંગ સાયટોમેટનો ઉપયોગ કરીને સ્ટેમ સેલની સીધી સાંદ્રતા, કાર્યક્ષમતા અને ફેનોટાઇપ માપન

અમૂર્ત: મેસેનચીમલ સ્ટેમ કોશિકાઓ પ્લુરીપોટેન્ટ સ્ટેમ કોશિકાઓનો સબસેટ છે જેને મેસોડર્મથી અલગ કરી શકાય છે.તેમની સ્વ-પ્રતિકૃતિ નવીકરણ અને બહુ-દિશા ભિન્નતા લાક્ષણિકતાઓ સાથે, તેઓ દવામાં વિવિધ ઉપચાર માટે ઉચ્ચ સંભાવના ધરાવે છે.મેસેનચીમલ સ્ટેમ કોશિકાઓમાં અનન્ય રોગપ્રતિકારક ફિનોટાઇપ અને રોગપ્રતિકારક નિયમન ક્ષમતા હોય છે.તેથી, સ્ટેમ સેલ ટ્રાન્સપ્લાન્ટેશન, ટીશ્યુ એન્જીનિયરિંગ અને અંગ પ્રત્યારોપણમાં મેસેનચીમલ સ્ટેમ કોશિકાઓ પહેલાથી જ વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાય છે.અને આ એપ્લિકેશનો ઉપરાંત, તેઓ મૂળભૂત અને તબીબી સંશોધન પ્રયોગોની શ્રેણીમાં સીડર કોષો તરીકે ટીશ્યુ એન્જિનિયરિંગમાં એક આદર્શ સાધન તરીકે ઉપયોગમાં લેવાય છે.અત્યાર સુધી, મેસેનચીમલ સ્ટેમ સેલના ગુણવત્તા નિયંત્રણ માટે વ્યાપકપણે સ્વીકૃત પદ્ધતિ અને ધોરણ નથી.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ આ સ્ટેમ કોશિકાઓના ઉત્પાદન અને ભિન્નતા દરમિયાન એકાગ્રતા, કાર્યક્ષમતા અને ફેનોટાઇપ લાક્ષણિકતાઓ (અને તેમના ફેરફારો) પર દેખરેખ રાખી શકે છે.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલને વધારાની મોર્ફોલોજિકલ માહિતી મેળવવામાં પણ ફાયદો છે, જે સેલ ગુણવત્તા નિરીક્ષણની સમગ્ર પ્રક્રિયા દરમિયાન કાયમી બ્રાઇટફિલ્ડ અને ફ્લોરોસેન્સ-આધારિત ઇમેજ રેકોર્ડિંગ્સ દ્વારા પ્રદાન કરવામાં આવે છે.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સ્ટેમ સેલના ગુણવત્તા નિયંત્રણ માટે ઝડપી, અત્યાધુનિક અને વિશ્વસનીય પદ્ધતિ પ્રદાન કરે છે.

સામગ્રી અને પદ્ધતિઓ:
પ્રોફેસર નિઆનમિન ક્વિ, AO/PI સ્ટેનિંગ સોલ્યુશન (Shanghai RuiYu, CF002) દ્વારા એડિપોઝ-ડેરિવ્ડ મેસેનચીમલ સ્ટેમ સેલ (AdMSCs) ભેટમાં આપવામાં આવ્યા હતા.એન્ટિબોડી: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD કંપની).
AdMSC ને 37℃, 5% CO2 ભેજયુક્ત ઇન્ક્યુબેટરમાં સંવર્ધન કરવામાં આવ્યું હતું.ઉપયોગ કરતા પહેલા ટ્રિપ્સિન સાથે ડાયજેસ્ટ કરો.
સીડી માર્કર સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયાને એન્ટિબોડીના મેન્યુઅલ તરીકે અનુસરવામાં આવી હતી.
કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સાથે સીડી માર્કર શોધ:
1. PE ચેનલને ઇમેજ PE ફ્લોરોસેન્સ પર સેટ કરીને સિગ્નલ-કલર એપ્લિકેશન પ્રક્રિયા બનાવવામાં આવી હતી.
2. દરેક ચેમ્બરમાંથી 3 ક્ષેત્રો કબજે કરવામાં આવ્યા હતા.
3. ઇમેજિંગ અને પ્રારંભિક વિશ્લેષણ પૂર્ણ થયા પછી, FCS સોફ્ટવેર દ્વારા હકારાત્મક અને નકારાત્મક ટ્રાન્સફેક્શન માટે થ્રેશોલ્ડ (લોગ ગેટ) સેટિંગ સેટ કરવામાં આવી હતી.

સ્ટેમ સેલ ગુણવત્તા નિયંત્રણ
નીચેની આકૃતિ (આકૃતિ 1) ની પ્રક્રિયા બતાવે છે સ્ટેમ સેલ ઉપચાર .

આકૃતિ 1: સ્ટેમ સેલ ઉપચાર માટેની પ્રક્રિયા

પરિણામો:
AdMSCs ની એકાગ્રતા, કાર્યક્ષમતા, વ્યાસ અને એકત્રીકરણ નક્કી કરવું.
AdMSCs ની કાર્યક્ષમતા AO/PI દ્વારા નક્કી કરવામાં આવી હતી, ગ્રીન ચેનલ અને રેડ ચેનલને ઇમેજ AO અને PI ફ્લોરોસેન્સ, ઉપરાંત એક તેજસ્વી ક્ષેત્ર સેટ કરીને ડ્યુઅલ-કલર એપ્લિકેશન પ્રક્રિયા બનાવવામાં આવી હતી.ઉદાહરણ છબીઓ આકૃતિ 2 માં બતાવવામાં આવી હતી.

આકૃતિ 2. એડએમએસસીના પરિવહન પહેલા અને પરિવહન પછીની છબીઓ.A. પરિવહન પહેલાં;એક પ્રતિનિધિ છબી બતાવવામાં આવી છે.B. પરિવહન પછી;એક પ્રતિનિધિ છબી બતાવવામાં આવી છે.

પરિવહન પહેલાની સરખામણીમાં પરિવહન પછી AdMSCs ની સદ્ધરતામાં ધરખમ ફેરફાર થયો હતો.પરિવહન પહેલાં સધ્ધરતા 92% હતી, પરંતુ પરિવહન પછી તે ઘટીને 71% થઈ ગઈ.પરિણામ આકૃતિ 3 માં દર્શાવવામાં આવ્યું હતું.

આકૃતિ 3. AdMSCs ના કાર્યક્ષમતા પરિણામો (પરિવહન પહેલા અને પરિવહન પછી)

કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ દ્વારા વ્યાસ અને એકત્રીકરણ પણ નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું.પરિવહન પહેલાની સરખામણીમાં પરિવહન પછી AdMSCs ના વ્યાસમાં ધરખમ ફેરફાર કરવામાં આવ્યો હતો.પરિવહન પહેલાં વ્યાસ 19µm હતો, પરંતુ પરિવહન પછી તે વધીને 21µm થઈ ગયો.પરિવહન પહેલાનું એકત્રીકરણ 20% હતું, પરંતુ પરિવહન પછી તે વધીને 25% થયું.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ દ્વારા કેપ્ચર કરાયેલી છબીઓમાંથી, પરિવહન પછી AdMSCs ના ફેનોટાઇપમાં ધરખમ ફેરફાર કરવામાં આવ્યા હતા.પરિણામો આકૃતિ 4 માં દર્શાવવામાં આવ્યા હતા.

આકૃતિ 4: વ્યાસ અને એકત્રીકરણ પરિણામો.A: AdMSCs ની પ્રતિનિધિ છબીઓ, AdMSCs ના ફેનોટાઈપ પરિવહન પછી ભારે બદલાઈ ગયા હતા.B: પરિવહન પહેલાં એકત્રીકરણ 20% હતું, પરંતુ પરિવહન પછી તે વધીને 25% થયું.C: પરિવહન પહેલાં વ્યાસ 19µm હતો, પરંતુ પરિવહન પછી તે વધીને 21µm થયો.

Countstar Rigel દ્વારા AdMSCs ની ઇમ્યુનોફેનોટાઇપ નક્કી કરો
AdMSCs ની ઇમ્યુનોફેનોટાઇપ કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ દ્વારા નિર્ધારિત કરવામાં આવી હતી, AdMSCs અનુક્રમે વિવિધ એન્ટિબોડી (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) સાથે ઉકાળવામાં આવ્યા હતા.PE ફ્લોરોસેન્સ, વત્તા તેજસ્વી ક્ષેત્રની છબી પર ગ્રીન ચેનલ સેટ કરીને સિગ્નલ-કલર એપ્લિકેશન પ્રક્રિયા બનાવવામાં આવી હતી.PE ફ્લોરોસેન્સ સિગ્નલના નમૂના લેવા માટે માસ્ક તરીકે તેજસ્વી ક્ષેત્ર ચિત્ર સંદર્ભ વિભાજન લાગુ કરવામાં આવ્યું હતું.CD105 ના પરિણામો બતાવવામાં આવ્યા હતા (આકૃતિ 5).

આકૃતિ 5: AdMSCs ના CD105 પરિણામો કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા.A: FCS એક્સપ્રેસ 5 પ્લસ સૉફ્ટવેર દ્વારા વિવિધ નમૂનાઓમાં CD105 ની હકારાત્મક ટકાવારીનું માત્રાત્મક વિશ્લેષણ.B: ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળી છબીઓ વધારાની મોર્ફોલોજિકલ માહિતી પૂરી પાડે છે.C: દરેક એક કોષના થંબનેલ્સ દ્વારા માન્ય પરિણામો, FCS સોફ્ટવેર ટૂલ્સે કોષોને તેમના અલગ-અલગ પ્રોટીન અભિવ્યક્તિ અનુસાર જુદા જુદા જૂથોમાં વિભાજિત કર્યા.

અન્ય એન્ટિબોડીઝ પરિણામો ફિગ 6 માં દર્શાવવામાં આવ્યા હતા

આકૃતિ 6: A: લાક્ષણિક સ્પિન્ડલ-આકારના મોર્ફોલોજી સાથે ASC ની પ્રતિનિધિ છબી.ઓલિમ્પસ માઇક્રોસ્કોપ દ્વારા કેપ્ચર.મૂળ વિસ્તૃતીકરણ, (10x).B: ASC નું એડિપોજેનિક ભિન્નતા રુથેનિયમ રેડ સ્ટેનિંગ દ્વારા પુરાવા મળે છે જે ખનિજીકરણના વિસ્તારો દર્શાવે છે.ઓલિમ્પસ માઇક્રોસ્કોપ દ્વારા કેપ્ચર.મૂળ વિસ્તૃતીકરણ (10x).C: ASC નું કાઉન્ટસ્ટાર FL પાત્રાલેખન.

સારાંશ:
કાઉન્ટસ્ટાર FL આ સ્ટેમ કોશિકાઓના ઉત્પાદન અને ભિન્નતા દરમિયાન એકાગ્રતા, કાર્યક્ષમતા અને ફેનોટાઇપ લાક્ષણિકતાઓ (અને તેમના ફેરફારો) પર દેખરેખ રાખી શકે છે.FCS એક્સપ્રેસ દરેક સિગ્નલ કોષની સમીક્ષા કરવા, ઇમેજ દ્વારા ડેટાને માન્ય કરવા માટેનું કાર્ય પૂરું પાડે છે.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલના પરિણામોના આધારે આગળના પ્રયોગો હાથ ધરવા માટે વપરાશકર્તાને આત્મવિશ્વાસ પણ મળી શકે છે.કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સ્ટેમ સેલના ગુણવત્તા નિયંત્રણ માટે ઝડપી, અત્યાધુનિક અને વિશ્વસનીય પદ્ધતિ પ્રદાન કરે છે.