कैंसर कोशिका अनुसंधान में काउंटस्टार के अनुप्रयोग

काउंटस्टार सिस्टम इमेज साइटोमीटर और सेल काउंटर को सिंगल बेंच-टॉप इंस्ट्रूमेंट में जोड़ती है।यह एप्लिकेशन-संचालित, कॉम्पैक्ट और स्वचालित सेल इमेजिंग सिस्टम सेल गिनती, व्यवहार्यता (एओ / पीआई, ट्रिपैन ब्लू), एपोप्टोसिस (एनेक्सिन वी-एफआईटीसी / पीआई), सेल सहित कैंसर सेल अनुसंधान के लिए एक ऑल-इन-वन समाधान प्रदान करता है। चक्र (पीआई), और जीएफपी/आरएफपी अभिकर्मक।

सार

कैंसर दुनिया भर में मृत्यु के मुख्य कारणों में से एक है, और कैंसर के उपचार के नए तरीकों के विकास का बहुत महत्व है।कैंसर कोशिका कैंसर की मूल शोध वस्तु है, कैंसर कोशिका से विभिन्न सूचनाओं का मूल्यांकन करने की आवश्यकता है।इस शोध क्षेत्र को तीव्र, विश्वसनीय, सरल और विस्तृत सेल विश्लेषण की आवश्यकता है।काउंटस्टार प्रणाली कैंसर कोशिका विश्लेषण के लिए एक सरल समाधान मंच प्रदान करती है।

काउंटस्टार रिगेल द्वारा कैंसर सेल एपोप्टोसिस का अध्ययन करें

यौगिकों के एक पैनल की विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए सेल संस्कृतियों के स्वास्थ्य का आकलन करने से लेकर विभिन्न प्रयोजनों के लिए एपोप्टोसिस assays नियमित रूप से कई प्रयोगशालाओं में उपयोग किया जाता है।
एपोप्टोसिस परख एक प्रकार है जिसका उपयोग एनेक्सिन वी-एफआईटीसी / पीआई धुंधला विधि द्वारा कोशिकाओं के एपोप्टोसिस प्रतिशत को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।एनेक्सिन वी प्रारंभिक एपोप्टोसिस सेल या नेक्रोसिस सेल के साथ फॉस्फेटिडिलसेरिन (पीएस) से बांधता है।पीआई केवल परिगलित/बहुत देर से चरण वाली एपोप्टोटिक कोशिकाओं में प्रवेश करता है।(आकृति 1)

ए प्रारंभिक एपोप्टोसिस एनेक्सिन वी (+), पीआई (-)

बी-लेट एपोप्टोसिस एनेक्सिन वी (+), पीआई (+)

चित्र1: एनेक्सिन वी एफआईटीसी और पीआई के साथ इलाज किए गए 293 कोशिकाओं के काउंटस्टार रिगेल चित्रों (5 x आवर्धन) का विस्तृत विवरण

कैंसर सेल का सेल साइकिल विश्लेषण

कोशिका चक्र या कोशिका-विभाजन चक्र उन घटनाओं की श्रृंखला है जो एक कोशिका में घटित होती हैं जिससे उसके विभाजन और उसके डीएनए (डीएनए प्रतिकृति) के दोहराव से दो बेटी कोशिकाओं का निर्माण होता है।एक नाभिक के साथ कोशिकाओं में, यूकेरियोट्स की तरह, कोशिका चक्र को भी तीन अवधियों में विभाजित किया जाता है: इंटरफेज़, माइटोटिक (एम) चरण, और साइटोकाइनेसिस।प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) एक परमाणु धुंधला डाई है जिसे अक्सर सेल चक्र को मापने के लिए उपयोग किया जाता है।क्योंकि डाई जीवित कोशिकाओं में प्रवेश नहीं कर सकती है, कोशिकाओं को धुंधला होने से पहले इथेनॉल के साथ तय किया जाता है।फिर सभी कोशिकाओं को दाग दिया जाता है।विभाजन की तैयारी करने वाली कोशिकाओं में डीएनए की मात्रा में वृद्धि होगी और आनुपातिक रूप से बढ़ी हुई प्रतिदीप्ति प्रदर्शित होगी।सेल चक्र के प्रत्येक चरण में कोशिकाओं के प्रतिशत को निर्धारित करने के लिए प्रतिदीप्ति तीव्रता में अंतर का उपयोग किया जाता है।काउंटस्टार छवि पर कब्जा कर सकता है और परिणाम एफसीएस एक्सप्रेस सॉफ्टवेयर में प्रदर्शित किए जाएंगे।(चित्र 2)

चित्रा 2: एमसीएफ -7 (ए) और 293 टी (बी) को पीआई के साथ सेल साइकल डिटेक्शन किट के साथ दाग दिया गया था, परिणाम काउंटस्टार रिगेल द्वारा निर्धारित किए गए थे, और एफसीएस एक्सप्रेस द्वारा विश्लेषण किया गया था।

सेल में व्यवहार्यता और जीएफपी अभिकर्मक निर्धारण

बायोप्रोसेस के दौरान, GFP को अक्सर एक संकेतक के रूप में पुनः संयोजक प्रोटीन के साथ फ्यूज करने के लिए उपयोग किया जाता है।निर्धारित GFP फ्लोरोसेंट लक्ष्य प्रोटीन अभिव्यक्ति परिलक्षित कर सकते हैं।काउंटस्टार रिगेल जीएफपी ट्रांसफेक्शन के साथ-साथ व्यवहार्यता के परीक्षण के लिए एक तेज और सरल परख प्रदान करता है।मृत कोशिका आबादी और कुल सेल आबादी को परिभाषित करने के लिए कोशिकाओं को प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) और होचस्ट 33342 के साथ दाग दिया गया था।काउंटस्टार रिगेल एक ही समय में जीएफपी अभिव्यक्ति दक्षता और व्यवहार्यता का मूल्यांकन करने के लिए एक त्वरित, मात्रात्मक विधि प्रदान करता है।(चित्र 4)

चित्र 4 : कक्ष Hoechst 33342 (नीला) का उपयोग करके स्थित हैं और GFP व्यक्त कक्षों (हरा) का प्रतिशत आसानी से निर्धारित किया जा सकता है ।गैर-व्यवहार्य सेल प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई; लाल) से सना हुआ है।

व्यवहार्यता और सेल गणना

एओ/पीआई डुअल-फ्लोरेसेस काउंटिंग सेल एकाग्रता, व्यवहार्यता का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला परख प्रकार है।यह विभिन्न प्रकार के सेल के अनुसार सेल लाइन काउंटिंग और प्राइमरी सेल काउंटिंग में विभाजित है।समाधान में हरे-फ्लोरोसेंट न्यूक्लिक एसिड दाग, एक्रिडीन नारंगी, और रेडफ्लोरेसेंट न्यूक्लिक एसिड दाग, प्रोपीडियम आयोडाइड का संयोजन होता है।प्रोपीडियम आयोडाइड एक झिल्ली अपवर्जन डाई है जो केवल समझौता झिल्ली के साथ कोशिकाओं में प्रवेश करती है जबकि एक्रिडीन ऑरेंज एक आबादी में सभी कोशिकाओं में प्रवेश करती है।जब दोनों रंग नाभिक में मौजूद होते हैं, तो प्रोपीडियम आयोडाइड फ्लोरेसेंस रेजोनेंस एनर्जी ट्रांसफर (एफआरईटी) द्वारा एक्रिडीन ऑरेंज फ्लोरोसेंस में कमी का कारण बनता है।नतीजतन, अक्षुण्ण झिल्लियों के साथ न्यूक्लियेटेड कोशिकाएं फ्लोरोसेंट हरे रंग को दाग देती हैं और उन्हें जीवित के रूप में गिना जाता है, जबकि समझौता झिल्ली वाले न्यूक्लियेटेड कोशिकाएं केवल फ्लोरोसेंट लाल दागती हैं और काउंटस्टार रिगेल सिस्टम का उपयोग करते समय मृत के रूप में गिना जाता है।गैर-न्यूक्लेटेड सामग्री जैसे लाल रक्त कोशिकाएं, प्लेटलेट्स और मलबे फ्लोरोसिस नहीं करते हैं और काउंटस्टार रिगेल सॉफ्टवेयर द्वारा अनदेखा किया जाता है।(चित्र 5)

चित्रा 5: काउंटस्टार ने पीबीएमसी एकाग्रता और व्यवहार्यता के सरल, सटीक निर्धारण के लिए दोहरी-प्रतिदीप्ति धुंधला विधि को अनुकूलित किया है।AO/PI से सना हुआ नमूनों का विश्लेषण Counstar Rigel के साथ किया जा सकता है