AOPI Dvostruko fluorescentno brojanje je vrsta analize koja se koristi za otkrivanje koncentracije i vitalnosti stanica.Otopina je kombinacija akridin naranče (zeleno-fluorescentna boja nukleinske kiseline) i propidij jodida (crvena fluorescentna boja nukleinske kiseline).Propidijev jodid (PI) je membransko isključenje boje koje ulazi samo u stanice s ugroženim membranama, dok akridin narančasta može prodrijeti u sve stanice u populaciji.Kada su obje boje prisutne u jezgri, propidij jodid uzrokuje smanjenje akridin narančaste fluorescencije prijenosom energije fluorescentne rezonancije (FRET).Kao rezultat toga, stanice s jezgrom s netaknutim membranama boje se fluorescentno zelenom bojom i broje se kao žive, dok stanice s jezgrom s ugroženim membranama boje samo fluorescentno crveno i broje se kao mrtve kada se koristi Countstar® FL sustav.Materijali bez jezgre kao što su crvena krvna zrnca, trombociti i ostaci ne fluoresciraju i softver Countstar® FL ih ignorira.
Proces terapije matičnim stanicama
Slika 4. Praćenje vitalnosti i broja stanica mezenhimskih matičnih stanica (MSC) za upotrebu u staničnim terapijama.
Odredite održivost MSC pomoću AO/PI i Trypan Blue testa
Slika 2. A. Slika MSC-a obojena AO/PI i Trypan Blue;2. Usporedba rezultata AO/PI i Trypan blue prije i nakon transporta.
Indeks loma stanica se mijenja, bojanje Trypan Blue nije toliko očito, teško je odrediti održivost nakon transporta.Dok dvobojna fluorescencija omogućuje bojenje živih i mrtvih stanica s jezgrom, generiranje točnih rezultata održivosti čak i u prisutnosti krhotina, trombocita i crvenih krvnih stanica.
