Sistèm Countstar la konbine sitomèt imaj la ak kontwa selilè nan yon sèl enstriman ban.Sistèm imaj selilè ki baze sou aplikasyon, kontra enfòmèl ant, ak otomatik bay yon solisyon tout-an-yon pou rechèch selil kansè yo, ki gen ladan konte selil, viabilite (AO/PI, ble tripan), apoptoz (Annexin V-FITC/PI), selil. sik (PI), ak transfèksyon GFP/RFP.
Résumé
Kansè se youn nan kòz prensipal lanmò atravè lemond, e devlopman nouvo metòd tretman kansè gen gwo siyifikasyon.Selil kansè se objè rechèch de baz kansè, plizyè enfòmasyon bezwen evalye nan selil kansè a.Zòn rechèch sa a bezwen analiz selilè rapid, serye, senp ak detaye.Sistèm Countstar bay yon platfòm solisyon senp pou analiz selil kansè yo.
Etid apoptoz selil kansè pa Countstar Rigel
Egzamen apoptoz yo itilize regilyèman nan anpil laboratwa pou divès kalite, soti nan evalye sante kilti selil yo pou evalye toksisite yon panèl konpoze.
Egzamen Apoptoz se yon kalite ki itilize pou detèmine pousantaj apoptoz nan selil pa metòd tach Annexin V-FITC/PI.Annexin V mare nan fosfatidilserin (PS) ak selil apoptoz bonè oswa selil nekwoz.PI sèlman antre nan selil nekrotik / trè ta-etap apoptotik.(Figi 1)
A: Apoptoz bonè Annexin V (+), PI (-)
B: Apoptoz an reta Annexin V (+), PI (+)
Figi 1: Detay elaji nan foto Countstar Rigel (5 x agrandisman) nan 293 selil, trete ak Annexin V FITC ak PI
Sik selil analiz selil kansè
Sik selilè a oswa sik divizyon selilè a se seri evènman ki fèt nan yon selil ki mennen nan divizyon li ak repetisyon ADN li (replikasyon ADN) pou pwodui de selil pitit fi.Nan selil ki gen yon nwayo, tankou nan ekaryot, sik selil la tou divize an twa peryòd: entèfaz, faz mitotik (M), ak sitokinèz.Propidium yodide (PI) se yon lank tach nikleyè ki souvan itilize pou mezire sik selilè.Paske lank la pa ka antre nan selil vivan yo, selil yo fikse ak etanòl anvan tach.Lè sa a, tout selil yo tache.Selil k ap prepare pou divizyon yo pral genyen yon kantite ADN ki ogmante epi montre fliyoresans pwopòsyonèlman ogmante.Diferans nan entansite fliyoresans yo itilize pou detèmine pousantaj selil yo nan chak faz sik selil la.Countstar ka pran imaj la epi rezilta yo pral parèt nan lojisyèl FCS eksprime.(Figi 2)
Figi 2: MCF-7 (A) ak 293T (B) yo te tache ak Twous Deteksyon sik selilè ak PI, rezilta yo te detèmine pa Countstar Rigel, ak analize pa FCS eksprime.
Viabilite ak detèminasyon transfè GFP nan selil
Pandan bioprosesis la, GFP souvan itilize pou fusion ak pwoteyin recombinant kòm yon endikatè.Detèmine ka fluorescent GFP reflete ekspresyon pwoteyin sib la.Countstar Rigel ofri yon tès rapid ak senp pou teste transfèksyon GFP ak viabilite.Selil yo te tache ak Propidium yod (PI) ak Hoechst 33342 pou defini popilasyon selil ki mouri a ak popilasyon selil total.Countstar Rigel ofri yon metòd rapid, quantitative pou evalye efikasite ekspresyon GFP ak viabilite an menm tan.(Figi 4)
Figi 4: Selil yo sitiye lè l sèvi avèk Hoechst 33342 (ble) ak pousantaj nan GFP eksprime selil (vèt) ka fasil detèmine.Selil ki pa solid yo tache ak yòd propidium (PI; wouj).
Viabilite ak konte selil
AO/PI Doub-fluoresce konte se kalite tès yo itilize pou detekte konsantrasyon selil, viabilite.Li divize an konte liy selilè ak konte selil prensipal dapre diferan kalite selil.Solisyon an gen yon konbinezon de tach vèt-fluoresan asid nikleyik, akridin zoranj, ak tach asid nikleyik redfluoresan, yodid propidium.Propidium yodide se yon lank eksklizyon manbràn ki antre sèlman nan selil ki gen manbràn konpwomèt pandan ke akridin zoranj antre nan tout selil nan yon popilasyon.Lè tou de koloran yo prezan nan nwayo a, yodid propidium lakòz yon rediksyon nan fluoresans akridin zoranj pa transfè enèji sonorite fluoresans (FRET).Kòm yon rezilta, selil nwayo ki gen manbràn entak tach fliyoresan vèt epi yo konte kòm vivan, tandiske selil nwayo ak manbràn konpwomèt sèlman tach fluoresan wouj epi yo konte kòm mouri lè w ap itilize sistèm Countstar Rigel la.Materyèl ki pa nwayo tankou globil wouj, plakèt ak debri pa fliyoresan epi lojisyèl Countstar Rigel la inyore.(Figi 5)
Figi 5: Countstar te optimize yon metòd tach doub-fluoresans pou detèminasyon senp, egzat nan konsantrasyon PBMC ak viabilite.Echantiyon tache ak AO/PI ka analize ak Counstar Rigel la
